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worthington LS004200說(shuō)明書
來(lái)源：溶組織梭菌
IUB：3.4.24.3
膠原酶原料認(rèn)證
粗膠原酶制劑含有兩種不同膠原酶的幾種同工型，一種巰基蛋白酶、梭菌蛋白酶、一種胰蛋白酶樣酶和一種氨肽酶。這種膠原蛋白水解和蛋白水解活性的組合可有效分解細(xì)胞間基質(zhì)，這是組織解離的重要部分。該復(fù)合物的一個(gè)成分是水解酶，它優(yōu)先在序列 Pro-Y-Gly-Pro 中的 Y-Gly 鍵處降解天然膠原蛋白中的螺旋區(qū)域，其中 Y 最常見(jiàn)的是中性氨基酸。這種切割產(chǎn)生對(duì)進(jìn)一步肽酶消化敏感的產(chǎn)物。粗膠原酶被半胱氨酸、EDTA 或鄰菲咯啉等金屬螯合劑抑制，但 DFP 不抑制。它也被一種大的血漿糖蛋白α2-巨球蛋白抑制。鈣2+是酶活性所必需的。每種膠原酶的特定酶譜已與獲得研究細(xì)胞的組織相關(guān)（或與放置細(xì)胞的用途相關(guān)），并且作為相關(guān)性的結(jié)果，Worthington 已經(jīng)建立了幾種類型的粗膠原酶：類型 1、2、3 和 4。
• 1 型粗膠原酶具有膠原酶、酪蛋白酶、梭菌蛋白酶和胰蛋白酶活性的原始平衡。
• 2 型含有較高相對(duì)水平的蛋白酶活性，尤其是梭菌蛋白酶。
• 3 型含有低水平的二級(jí)蛋白酶。
• 4 型被設(shè)計(jì)成胰蛋白酶活性特別低，以限制對(duì)膜蛋白和受體的損害。
• 5 型 含有較高的膠原酶和酪蛋白酶值。
• 6 型 含有高膠原酶活性，酪蛋白酶與膠原酶的比例約為 2:1。設(shè)計(jì)為相對(duì)于 I 型 ( col G)富含 II 型 ( col H) 膠原酶。
• 7 型膠原酶和酪蛋白酶的活性比 1 型和 2 型膠原酶高四倍。
•純化的膠原酶，代碼：CLSPA，含有最少的二次蛋白水解活性和高膠原酶活性。
新的！ 無(wú)動(dòng)物型 AFA、AFB 和 AFC、STZ1 和 STZ2膠原酶來(lái)源于在*不含動(dòng)物成分的培養(yǎng)基中生長(zhǎng)的培養(yǎng)物，設(shè)計(jì)用于必須防止引入潛在動(dòng)物源性病原體的生物加工應(yīng)用。二級(jí)蛋白酶的水平與 1 型和 2 型膠原酶相似。 • CLSAFA 是最初的 AFA 等級(jí)，旨在含有類似于 1 型和 2 型膠原酶的膠原酶和二級(jí)蛋白酶。• CLSAFB 含有比 CLSAFA 更高的膠原酶和酪蛋白酶活性。 • CLSAFC 具有特別低的胰蛋白酶活性，類似于 4 型膠原酶。 • STZ1 和 STZ2，0.22μ 過(guò)濾的 STEMxyme ® AOF 膠原酶/中性蛋白酶 (Dispase®) 混合物，用于原代細(xì)胞和干細(xì)胞分離。 |
Worthington 還提供預(yù)包裝形式的每種類型的 0.22µm 過(guò)濾制劑，用于直接重組和用于細(xì)胞分離和培養(yǎng)程序。酶類型和不同組織的有效性之間的相關(guān)性很好，部分原因是使用的可變參數(shù)。然而，大多數(shù)研究人員認(rèn)為粗膠原酶批次的組織分型是一項(xiàng)有價(jià)值的服務(wù)。Worthington 膠原酶和污染物檢測(cè)的詳細(xì)說(shuō)明可在Worthington 酶手冊(cè)中找到。此外，組織特異性參考和詳細(xì)的分離條件可以在Worthington 組織分離指南中找到。
膠原酶測(cè)定是Mandl的改進(jìn)，其中將膠原酶與天然膠原一起溫育5小時(shí)，并使用Moore and Stein, JBC, 176 , 367, (1948)比色茚三酮法測(cè)定膠原分解的程度。釋放的氨基酸以每毫克膠原酶微摩爾亮氨酸表示。
用途：粗膠原酶廣泛用于酶促原代細(xì)胞分離和組織解離程序。大多數(shù)研究人員要么使用粗制膠原酶制劑，例如 1、2、3 和 4 型，要么使用色譜純化的膠原酶（代碼：CLSPA）；后者通常與二級(jí)酶如彈性蛋白酶、透明質(zhì)酸酶等結(jié)合。為了獲得最佳結(jié)果，必須針對(duì)要解離的組織調(diào)整蛋白水解活性的精確混合。不同組織的類型和有效性之間的相關(guān)性很好，并且可能部分取決于使用參數(shù)和目標(biāo)以及批次間的差異。如需更多信息，請(qǐng)參閱膠原酶取樣程序信息。Worthington 還出版了組織分離指南它提供了有關(guān)用于這些應(yīng)用的酶的更多信息以及多種細(xì)胞和組織類型的具體參考。
單位定義：一個(gè)單位在 37°C、pH 7.5 下 5 小時(shí)內(nèi)從膠原蛋白中釋放 1 微摩爾 L-亮氨酸當(dāng)量
相關(guān)產(chǎn)品：
膠原蛋白 (CL)
脫氧核糖核酸酶 I (DP/D/DCLS/D2/DPFF/DPRF)
彈性蛋白酶 (ES/ESL/ESFF)
透明質(zhì)酸酶 (HSE/HSEP)
中性蛋白酶 (Dispase, NPRO)
木瓜蛋白酶 (PAP/PAPL/PAP2)蛋白酶 K (PROK)
胰蛋白酶 (TL/TRL/TRL3/TRLS/TRTPCK)
胰蛋白酶抑制劑 (LBI/OI/SI/SIC)
細(xì)胞分離優(yōu)化系統(tǒng) (CIT)
肝細(xì)胞分離系統(tǒng) (HIS)
新生兒心肌細(xì)胞分離系統(tǒng) (NCIS)
木瓜蛋白酶解離系統(tǒng) (PDS/PDS2)
| 膠原酶，1 型 酶活性的原始平衡。每個(gè)批次都檢測(cè)膠原酶、酪蛋白酶、梭菌蛋白酶和胰蛋白酶活性。建議用于上皮細(xì)胞、肝細(xì)胞、肺細(xì)胞和腎上腺原代細(xì)胞分離。一種透析的凍干粉末。 儲(chǔ)存在 2-8°C。 | ≥125 單位/毫克干重 | CLS-1 | 100 毫克 | LS004194 |
| 塊 | LS004193 | |||
| 1克 | LS004196 | |||
| 5克 | LS004197 | |||
| 塊 | LS004200 |
