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"T4 DNA連接酶
別名：T4 DNA Ligase
規格：BR，1u/ul,帶PEG
包裝：LC200u
貨號：YY10594
CAS號：
保存條件：

產品詳細資料如下：

英文名稱：T4 DNA Ligase
CAS號：9015-85-4
分子量：55.3kDa，單體
來源：含有T4噬菌體克隆基因30的大腸桿菌
濃度：1u/ul（200CEU/ul）
活性定義：是指在ATP-PPi交換反應中，37℃、30分鐘內將1nmol [32PPi]轉換為Norit可吸收形式所需的酶量（weiss單位，1個weiss單位相當于約200個粘性末端連接單位。1個粘性末端連接單位：20ul反應體系（50mM Tris-HCL（PH7.5）, 10mM DTT, 10mM MgCL2, 1mM ATP, 25ug/ml BSA, 12uM（300ug/ml）的5-DNA末端）中，在16℃、30分鐘內連接50%連接HindIII酶切的Lambda DNA 產物所需的酶量）
酶活性分析混合物：66mM Tris-HCL（PH7.6）, 10mM DTT, 6.6mM MgCL2, 0.066mM ATP, 3.3uM[32PPi]
保存液組分：20mM Tris-HCL（PH7.5）, 50mM KC1, 1mM DTT，0.1mM EDTA和50%（v/v）甘油
10×T4 DNA Ligase緩沖液（#B69）：400mM Tris-HCL, 100mM MgCL2, 100mM DTT, 5mM ATP（PH7.5,25℃）
50% PEG溶液：50%（w/v）聚乙二醇4000
抑制劑：當反應體系中NaC1或KC1的濃度超過200 mM時，可強烈抑制T4 DNA Ligase活性
失活：65℃加熱10分鐘或70℃加熱5分鐘
注意：聚乙二醇（PEG）可極大地增加平末端DNA的連接效率，PEG4000在反應體系中的推薦濃度為5%（w/v）；T4 DNA Ligase與DNA結合會改變條帶的瓊脂糖凝膠電泳遷移率，為避免此現象，電泳前需處理樣本或分子量標準。樣本處理如下：樣本與Fermentas公司6×DNA Loading Dye&SDS溶液（#R1151）混合，75℃加熱5分鐘或65℃加熱10分鐘后冰浴保存；轉化時，連接產物的體積不得超過感受態細胞體積中的10%；電轉化之前，先用氯仿抽提方法除去連接混合物中的T4 DNA Ligase，然后經乙醇沉淀純化抽提產物
質量控制：測試表明無內切脫氧核糖核酸酶、核糖核酸酶、磷酸酶污染。功能檢測：粘性末端或平末端DNA的連接能力
性狀：液體。該酶催化雙鏈DNA或RNA中毗鄰的5'磷酸基團和3'-羥基末端之間形成磷酸二酯鍵，還可以修復雙鏈DNA、RNA或DNA/RNA復合體中的單鏈切口，連接DNA的粘性和平末端，但該酶對單鏈核酸無酶活性。該酶需要輔因子ATP
用途：科研、實驗。粘性末端或平末端雙鏈DNA的連接；雙鏈寡核苷酸接頭與雙鏈DNA連接；雙鏈DNA、RNA或DNA-RNA復合體中缺口的修復；連接酶介導的RNA檢測；位點特異性突變；擴增片段長度多態性
貯存條件： -20°C貯存

相關試劑如下：
T4 DNA連接酶/T4 DNA Ligase/ BR，5u/ul,帶PEG 200u
T4 DNA連接酶/T4 DNA Ligase/ BR，30u/ul HC1000u
末端轉移酶/TDT/9027-67-2 BR，20u/ul 500U
5´-核苷酸酶/5′-NT/9027-73-0 BR，200u/mg 100U
5-溴-4氯-3-吲哚N-乙酰-β-D-氨基半乳糖苷/X-GalNAc/129572-48-1 超純，98% 25毫克
對硝基苯基-α-D-吡喃葡萄糖苷/PNPG/3767-28-0 生物技術級，99% 1克
鄰硝基苯-α-D-吡喃半乳糖苷/ONPG/19887-85-5 BR，98% 1克
n-辛基-β-D-吡喃葡萄糖苷/OGP/29836-26-8 試劑級，98% 250毫克
對硝基苯-N-乙酰-β-D-氨基半乳糖苷/4-Nitrophenyl N-acetyl-β-D-galactosaminide/14948-96-0 BR，98% 250毫克
復合蛋白酶/Compound proteinase/ BR，120u/mg 5克
谷氨酰胺轉移酶/TG/80146-85-6 BR，1.5u/mg 2U

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