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Hygromycin B（潮霉素B）是由吸水鏈霉菌（Streptomyces hygroscopicus）代謝產生的一種氨基糖苷類抗生素，通過干擾70S核糖體易位和誘導對mRNA模板的錯讀而抑制蛋白合成，從而殺死原核（如細菌）、真核（如酵母菌，真菌）和高等哺乳動物真核細胞。
大腸桿菌（ Escherichia coli.）來源的潮霉素抗性基因（hyg或hph），編碼潮霉素B磷酸轉移酶，將潮霉素B轉化成不具有生物活性的磷酸化產物，從而起到解毒作用。針對這一原理，潮霉素B是一種非常有用的選擇性標記，用來篩選和維持培養成功轉染潮霉素抗性基因的原核或者真核細胞。另外，由于作用模式的差異，常與G418 (Cat：AB11L234)，Zeocin（Cat：AB11L251）和Blasticidin S（Cat：AB11L221）聯合使用進行雙抗性陽性細胞株的選擇。潮霉素B還能用作抗病毒劑，因其選擇性滲透進入yin病毒感染增強通透性的細胞，且具有抑制翻譯的功效。還可混合入動物飼料中起到驅蟲功能。
訂購信息
產品名稱 | 貨號 | 規格 | 價格 |
Hygromycin B（潮霉素B） | AB11L124 | 1 g | 600 |
運輸與保存
藍冰運輸。-20℃保存，有效期48個月。
技術參數
1.CAS：31282-04-9
2.溶解性：100mg/ml in Water
3.純度：≥90%
4.酶活/效價：≥950U/mg
5.結構式：
使用方法
1.常用篩選濃度
【注】：潮霉素B用來篩選穩轉株的工作濃度需要根據細胞類型，培養基，生長條件和細胞代謝率而變化，推薦使用濃度為50-1000μg/mL。對于第一次使用的實驗體系建議通過建立殺滅曲線（kill curve），即劑量反應性曲線，來確定最佳篩選濃度。一般而言，哺乳動物細胞50-500μg/mL；細菌/植物細胞20-200μg/mL；真菌300-1000μg/mL。
2.殺滅曲線的建立
【注】：為了篩選得到穩定表達目的蛋白的細胞株，需要確定能夠殺死未轉染宿主細胞的抗生素zui低濃度，可通過建立殺滅曲線（劑量反應曲線）來實現，至少選擇5個濃度。
（1）第一天：未轉化的細胞按照20-25%的細胞密度鋪在合適的培養板上，37℃，CO2培養過夜；注：對于需要更高密度來檢測活力的細胞，可增加接種量。
（2）根據細胞類型，設定合適范圍內的濃度梯度。以哺乳動物細胞為例，可設定50，100，250，500，750，1000μg/mL。先用去離子水或者PBS buffer按照1:10的比例將母液稀釋到5 mg/ml，然后按照下表稀釋到相應濃度的工作液。
終濃度（μg/mL） | 培養基體積（ml） | 5mg/ml潮霉素B加入體積（ml） |
50 | 9.9 | 0.1 |
100 | 9.8 | 0.2 |
250 | 9.5 | 0.5 |
500 | 9.0 | 1.0 |
750 | 8.5 | 1.5 |
1000 | 8.0 | 2.0 |
（3）第二天：替換舊的培養基，換用新鮮配制的含有相應濃度藥物的培養基。每個濃度做三個平行孔。
（4）接下來每3-4 d更換新的含藥物培養基。
（5）按照固定的周期（如每2 d）進行活細胞計數來確定阻止未轉染細胞生長的恰當濃度。選擇在理想的天數（通常是7-10 d）內能夠殺死絕大多數細胞的zui低濃度為穩定轉染細胞篩選用的工作濃度。
（3）穩定轉染細胞的篩選
（1）轉染48 h后，用含有適當濃度的潮霉素B篩選培養基來傳代細胞（直接傳代或者稀釋后傳代）。
【注】：細胞處于活躍分裂狀態時抗生素的殺傷效果很好。則當細胞過于稠密，其效率會降低。為了得到較好的篩選效果，最好將細胞稀釋至豐度不超過25%。
（2）每隔3-4 d更換含有藥物的篩選培養液。
（3）篩選7 d后觀察并評估細胞克隆（集落）的形成情況。集落的形成可能還需要一周或者更多的時間，這取決于宿主細胞類型，轉染，以及篩選效果。
（4）挑取并轉移5-10個抗性克隆于35mm細胞培養板，繼續用含藥物的篩選培養液維持培養7 d。
（5）之后更換正常培養基培養即可。
注意事項
1.本產品僅限于科學實驗研究使用，不得用于臨床診斷、治療等領域。
2.潮霉素B的抗性基因（hyg或hph）除了來自E. Coli.之外，還發現于其他的菌株，包括Streptomyces hygroscopicus和Klebsiella pneumoniae。
3.本品為有毒化合物，避免與皮膚和眼睛接觸，請小心操作。
4.為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
5.以上數據均來自公開文獻, 李記生物暫未本產品進行獨立驗證, 僅供參考。
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