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正確選擇轉化細胞分離試劑盒工作原理

閱讀:175          發布時間:2017-10-30

正向選擇VS負向選擇轉化細胞分離試劑盒的工作原理主要有兩種,正向選擇和負向選擇。正向選擇的試劑盒,使用與目標細胞直接結合的抗體來進行捕獲。這種抗體通常與磁珠相連,可以利用磁鐵將懸液中的抗體-磁珠-細胞復合物提取出來,再通過二抗將磁珠與目標細胞分開。負向選擇的試劑盒也采用類似的抗體包被磁珠,不過這種試劑盒是通過去除樣品中的非目的細胞,來間接捕獲目的細胞。
這兩種細胞分離試劑盒如何取舍,主要取決于目標細胞的表面是否具有特異性強的篩選標志。這樣的篩選標志能夠實現特異性的捕獲,避免所獲得的細胞被非目標細胞污染。如果你的目標細胞剛好具有這樣的篩選標志,那么正向選擇的細胞分離試劑盒就是*選擇。但如果目標細胞并不具有特異性強的篩選標志,那我們還是選用負向選擇的細胞分離試劑盒。
篩選標志的確定
通過PubMed等數據庫中的文獻,我們一般可以確定在目標細胞上表達的篩選標志。如果文獻中找不到適合自己的表面標志,我們還可以用目標轉化細胞的DNA序列進行BLAST搜索。BLAST搜索結果會顯示,目標細胞上可能表達的表面標志,在此基礎上可以選取用于捕獲的細胞表面蛋白。舉例來說,對一個T細胞進行BLAST搜索,結果會顯示該細胞是否表達CD4或CD8。在得知目標細胞表達CD4之后,我們可以先對樣品進行一個免疫實驗(如ELISA),以檢驗BLAST搜索的結果。一旦證實目標細胞的確表達CD4,我們就可以用相應試劑盒來篩選CD4陽性的T細胞。
小鼠C肽(C-Peptide)      促尿鈉排泄肽前體CIgG    真菌 酵母菌
小鼠D-乳酸脫氫酶(D-LDH)      促卵泡刺激素受體IgG    霉菌 酵母菌
小鼠E鈣粘著蛋白/上皮性鈣黏附蛋白(E-Cad)     促卵泡刺激素IgG    真菌 酵母菌
小鼠E選擇素(E-Selectin/CD62E)      促進凋亡基因IgG    真菌 酵母菌
小鼠FMS樣酪氨酸激酶3(Flt3)      促甲狀腺素受體IgG    真菌 霉菌 酵母菌
小鼠FMS樣酪氨酸激酶3配體(Flt3L)     促甲狀腺素受體IgG    真菌
小鼠GATA結合蛋白4(GATA4)     促甲狀腺素受體(N端)IgG    Candida 酵母菌
小鼠IgG      促甲狀腺素受體(C端)IgG    霉菌 酵母菌
小鼠IgM      促甲狀腺素釋放激素IgG    酵母菌 霉菌
轉化細胞

 

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