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干細胞染色原理詳細解答
閱讀：830 發布時間：2017-11-15干細胞是細胞活性染料，常用于檢測細胞膜的完整性。還常用于檢測細胞是否存活?；罴毎粫蝗境伤{色，而死細胞會被染成淡藍色。
臺盼藍可被巨噬細胞吞噬，故可用于巨噬細胞的活體染色劑。
步驟：（來自supergama）
1、4%臺盼藍母液：稱取4g臺盼藍，加少量蒸餾水研磨，加雙蒸水至100ml，用濾紙過濾，4度保存。使用時。用PBS稀釋至0.4%。（也可買Gibco的成品）; T$ d& \! h% l, E） Z） A- W
2、胰酶消化貼壁細胞，制備單細胞懸液，并作適當稀釋。
3、染色：細胞懸液與0.4%臺盼藍溶液以9:1混合混勻。（終濃度0.04%）
4、計數：在三分鐘內，分別計數活細胞和死細胞。 1 e7 e* I* S） ^% X8 U$ K- _
5、鏡下觀察，死細胞被染成明顯的藍色，而活細胞拒染呈無色透明狀。
6、統計細胞活力：活細胞率（%）= 活細胞總數/（活細胞總數+死細胞總數）×100%
細胞損傷或死亡時，臺盼藍可穿透變性的細胞膜，與解體的DNA 結合，使其著色。而活細胞能阻止染料進入細胞內。故可以鑒別死細胞與活細胞。嚴格來說，臺盼藍染色檢測的是細胞膜的完整性， 通常認為細胞膜喪失完整性，即可認為細胞已經死亡。這被稱為染料排除測試。通過顯微鏡很容易就能識別出死亡的被臺盼藍染色的細胞，并可使用細胞計數器進行計數。
機理：正常的活細胞，胞膜結構完整，能夠排斥臺盼藍，使之不能夠進入胞內；而喪失活性或細胞膜不完整的細胞，胞膜的通透性增加，可被臺盼藍染成藍色。通常認為細胞膜完整性喪失，即可認為細胞已經死亡。因此，借助臺盼藍染色可以非常簡便、快速地區分活細胞和死細胞。臺盼藍是組織和細胞培養中zui常用的死細胞鑒定染色方法之一。
保存條件
室溫保存
說明
干細胞有潛在致癌危險
高糖，含丙酮酸鈉和谷氨酰胺 DMEM DME培養基 10升
干酪素胰酶水解而成，培養基原材料 Peptone from Casein 酪蛋白胨 250
甘露醇卵黃多粘菌素瓊脂基礎配套試劑 Egg-Yolk Polymyxin B Solution 卵黃多粘菌素B溶液 50毫升
副溶血性弧菌的選擇性增菌培養 Alkaline Peptone Water 3%氯化鈉堿性蛋白胨水 250克
副溶血性弧菌的選擇性分離培養 Tetracyline Examination Agar 四環素檢定瓊脂 250克
副溶血性弧菌的選擇性分離培養 Sodium Chloride Sucrose Agar 氯化鈉蔗糖瓊脂 250克
副溶血性弧菌的選擇性分離培養 Halophilic Bacteria Selective Agar 嗜鹽菌選擇性瓊脂 250克
副溶血性弧菌的溶血試驗 Sodium Chloride Blood Agar Base 氯化鈉血瓊脂基礎 250克
干細胞