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RIPA 裂解液（強） (RIPA Lysis Buffer)
RIPA 裂解液(RIPA Lysis Buffer)是一種傳統(tǒng)的細胞、組織快速裂解液。RIPA 裂解液裂解后的蛋白樣品可以用于常規(guī)的 Western、IP 等。RIPA 裂解液的主要成分為 Tris-Hcl，NaCl，Triton X-100， sodium deoxycholate，SDS，可以有效裂解不同樣本并抑制蛋白降解。
RIPA 裂解液 50mL
運輸與保存方法冰袋運輸，4℃保存，有效期一年。
操作說明：對于組織樣品
組織塊用冷 PBS 洗滌，去除血污。剪成小塊置于勻漿器中。
2. 加入 10 倍組織體積本試劑（使用前數分鐘內加入蛋白酶抑制劑）冰上全勻漿。
3. 將勻漿液轉移至 1.5ml 離心管中，振蕩。冰浴 30min，期間用移液器反復吹打，確保細胞全裂解。
4. 12000g 離心 5min，收集上清，即為總蛋白溶液。
對于培養(yǎng)細胞樣品：
1. 對于貼壁細胞：
a.用 PBS 沖洗細胞 2-3 次。最后一次全吸干殘留液。
b.加入適當體積的細胞總蛋白提取試劑（使用前數分內加入蛋白酶抑制劑）于培養(yǎng)板、瓶內 3-5 分鐘。期間反復晃動培養(yǎng)板、瓶，使試劑與細胞充分接觸。
c.用細胞刮刀將細胞及試劑刮下，收集到 1.5ml 離心管中。
2. 對于懸浮細胞：離心收集細胞，每 6 孔板細胞加約 250 ul 細胞總蛋白提取試劑（在使用前數分鐘內加入蛋白酶抑制劑），振蕩。
3. 冰浴 30min，期間每 10 分鐘用 200ul 移液器反復吹打數次，確保細胞全裂解。
4. 12000g 離心 5min，收集上清，即為總蛋白。
注意事項：
對于組織樣品：每 50mg 組織約加入 1ml 的本試劑裂解。對于軟骨、皮膚等組織，可適當減少試劑用量，以提高蛋白濃度。
對于培養(yǎng)細胞樣品：
正常細胞密度下，每個 6 孔板細胞加入 250ul 左右裂解液。其它類推。
2. 樣本過量時裂解可能會出現較粘稠狀。可用移液器反復吹打，直至呈液狀為止。如果一直較稠，可再加入適量裂解液，或者使用超聲破碎儀。
3. 此試劑對人體有害，請適當防護。
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