PriCells: 正常小鼠原代破骨細胞培養方案

實驗材料：

1. 正常小鼠乳鼠顱蓋骨組織；

2. 不含Ca2+和Mg2+的1×PBS，添加200000IU/L青霉素、200mg/L鏈霉素，pH7.2；

3. 0.1%Ⅰ型膠原酶；

4. 培養器具：培養瓶或皿（用多聚賴氨酸包被）、200目不銹鋼網篩、眼科剪、鑷子等；

培養方法：

1. 選用出生1-3天小鼠乳鼠，處死，放入75%酒精中浸泡2—3分鐘，轉至超凈工作臺內，取顱蓋骨；

2. 將組織放入含有1×PBS（pH7.2）中沖洗3次；

3. 用眼科剪將顱蓋骨剪成1×1mm3大小組織塊，轉至15ml離心管內，加入0.1%Ⅰ型膠原酶，37℃水浴消化90min；

4. 加入含血清的培養基，終止酶反應；

5. 將消化后的組織過200目網篩，收集濾液于15ml離心管中，1000rpm/min離心10min，棄去上清，加入培養液重懸，染色計數細胞；

6. 調整細胞密度以合適的密度接種入培養瓶，放置于37℃，5%CO2培養箱中培養。待細胞長滿瓶皿的生長表面即可傳代；

7. PriCells-原代骨細胞細胞特制基礎培養基；

8. PriCells-原代骨細胞細胞培養特制添加劑

9. PriCells-原代細胞分離試劑盒；

10. PriCells-原代細胞鑒定試劑盒；