植物銨態氮試劑盒說明書
微量法100T/96S
注 意：正式測定之前選擇2-3個預期差異大的樣本做預測定。
測定意義：
氮素是構成生物體的一種必需元素，自然界中的氮素循環包括許多轉化作用。空氣中的氮氣被固氮微生物及植物與微生物的共生體固定成氨態氮，經過硝化微生物的作用轉化成硝態氮，后者被植物或微生物同化成有機氮化物，植物組織氨氮含量可反映植物受脅迫的程度。
測定原理：
α-氨基酸與水合茚三酮溶液一起加熱，經氧化脫氨變成相應的α-酮酸，酮酸進一步脫羧變成醛，水合茚三酮則被還原，在弱酸環境中，還原型茚三酮，氨和另一分子水合茚三酮反應， 縮合生成藍紫色物質，在580nm處有特征吸收峰。
自備實驗用品及儀器：
天平、研缽、常溫離心機、可見分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96孔板、恒溫水浴鍋。
試劑組成和配制：
提取液：液體100mL×1瓶，4℃保存。
試劑一：液體9mL×1瓶，4℃保存。
試劑二：粉劑×1瓶，4℃避光保存。臨用前加1.5mL蒸餾水充分溶解。
試劑三：液體15mL×1瓶，4℃保存。
樣本處理：
按照質量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g，加入1mL提取液）加入提取液，室溫勻漿后于25℃，12000g離心10min，取上清待測。
測定操作表：
空白管 | 測定管 | |
樣本（μL） | 60 | |
蒸餾水（μL） | 60 | |
試劑一（μL） | 90 | 90 |
試劑二（μL） | 15 | 15 |
充分混勻，沸水浴5min后自然冷卻10min | ||
試劑三（μL） | 150 | 150 |
充分混勻，取200μL于微量石英比色皿/96孔板中測定580nm處吸光值A，△A=A測定管-A空白管 | ||
注意：空白管只需測定一次。
計算公式：
a. 用微量石英比色皿測定的計算公式如下
標準曲線：y=0.1535x-0.0279，R2=0.9993
NH4+—N含量（μg/g 鮮重）=（△A+0.0279）÷ 0.1535×V反總÷（W×V樣÷V樣總）
= 32.9×（△A+0.0279）÷W
V反總：反應總體積，0.315mL；V樣：反應體系中加入樣本體積，0.06mL；V樣總：加入提取液體積，1mL，W：樣本質量，g
a. 用96孔板測定的計算公式如下
標準曲線：y=0.0768x-0.0279，R2=0.9993
NH4+—N含量（μg/g 鮮重）=（△A+0.0279）÷ 0.0768×V反總÷（W×V樣÷V樣總）
= 65.8×（△A+0.0279）÷W
V反總：反應總體積，0.315mL；V樣：反應體系中加入樣本體積，0.06mL；V樣總：加入提取液體積，1mL，W：樣本質量，g
注意事項：
1. 提取好的待測液盡快測定，低溫保存不得超過24小時。
2. 沸水浴時間不宜過長，否則會對測定結果有影響。
3. 顯色后20min內完成測定。
4. Z低檢出限為18μg/g。
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