PCR技術操作流程
一、PCR 的基本原理
類似于 DNA 的體內復制。首先待擴增 DNA 模板加熱變性解鏈，隨之將反應混合物冷卻至某一溫度，這一溫度可使引物與它的靶序列發生退火，再將溫度升高使退火引物在 DNA 聚合酶作用下得以延伸。這種熱變性 - 復性 - 延伸的過程就是一個 PCR 循環，PCR 就是在合適條件下的這種循環的不斷重復。
二、PCR 反應體系
1. 緩沖液
標準的緩沖液含 1pmol/ml Tris ·HCl，其 pH 為 8.3-9.0（室溫），而在延伸溫度（72 ℃）下，pH 值接近 7.2 。緩沖液中含有一種二價陽離子，用于激活 DNA 聚合酶的活性中心，一般使用 Mg2+。
2.dNTP
脫氧核糖核苷三磷酸的縮寫，是包括 dATP, dGTP, dTTP, dCTP 等在內的統稱，即合成新的 DNA 鏈的材料。4 種 dNTP 的濃度相等，總濃度一般為 200pmol/ml （即飽和濃度）。dNTP 可與 Mg2+ 結合，使游離的 Mg2+ 濃度下降，影響 DNA 聚合酶的活性。
3. 引物
引物是一段短的單鏈 DNA 片段，可結合在核酸鏈上與之互補的區域，其功能是作為核苷酸聚合作用的起始點，DNA 聚合酶可由其 3′端開始合成新的核酸鏈。引物長度一般以 18～30bp 為宜，過短則降低特異性，過長則會引起引物間的退火而影響有效擴增，同時也增加引物合成的成本。引物的堿基順序不能與非擴增區有同源性。
4. 模板
模板是一段單鏈或者雙鏈 DNA，提供用于進行 PCR 擴增的原始信息。對模板的純度要求低，但不能混有蛋白酶、核酸酶、DNA 聚合酶抑制劑、DNA 結合蛋白等。模板 DNA 應該盡量保持低溫保存。
5.Taq DNA 聚合酶
Taq DNA 聚合酶以 DNA 為復制模板，從將 DNA 由 5' 端點開始復制到 3' 端的酶。DNA 聚合酶的主要活性是催化 DNA 的合成（在具備模板、引物、dNTP 等的情況下）及其相輔的活性。必須一直保存于－20℃，內含甘油保存。最適反應溫度 72 ℃，即延伸溫度。通常在配制 PCR 體系的最后加入。
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