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來源:上海拜力生物科技有限公司   2018年10月09日 17:07  

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作為一種生物產品,抗體的效果很容易隨批次而變化。可信度較高的抗體供應商現在通常會向科研人員提供數據,來介紹他們目錄中的每一種抗體是如何被驗證的。有自主測試能力的實驗室也可以自行檢驗他們所訂購的抗體。在實驗中計劃使用的特定實驗流程也是采購中應該考慮的因素。沒有報告抗體來源和貨號的論文其實很難重復。為了獲得大的可靠性,研究人員應該嘗試用同一批次的抗體進行一系列的實驗。

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引起 ELISA 測定結果與文獻報導不一致的原因主要有三點,試劑因素、標本因素和操作因素。試劑因素:1. 試劑應選擇靈敏度高、特異性好、穩定性好、批間差小、操作方便的試劑。 2.不同廠家的試劑一定不能混用,包括底物和洗滌液。由于校準標準有差異,還有抗體、檢測方法、試劑、交叉反應等因素都會導致對樣本的檢測結果不一致。如:有的廠家酶標板孔間 CV 值大于 20%,標記酶的活性及顯色液的穩定性比較差,使用劣質的試劑必然導致結果的假陽性或假陰性。 3. 要注意試劑的批號和出廠日期,雖然試劑的有效期多為 1 年,好選擇剛出廠的試劑盒。 4. 避免選擇假的 ELISA 試劑盒。有些廠家為夸大生產 ELISA 的指標范圍,用一種指標來冒充其它指標,造成各種種屬、各種指標都可以做的假象。標本因素和操作因素:血清是常用的 ELISA 標本,血漿一般可視為與血清同等的標本,標本引起的假陽性和假陰性結果主要是干擾性物質所致,分為內源性物質和外源性物質兩種。 內源性物質:有人認為大約 40%的人血清標本中含有非特異性干擾物質,可以不同程度影響檢測結果。常見的干擾物質有:類風濕因子、補體、嗜異性抗體、嗜靶抗原自身抗體、醫源性誘導的抗鼠 Ig (s) 抗體、交叉反應物質和其它物質等。外源性物質:外源性物質常常是由于用于 ELISA 測定的血標本的采集、貯存等不當所致。如標本溶血、標本被細菌污染、標本貯存過久、標本凝集不全和采血管中添加物等影響。

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編輯:小檀20181009

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