在ELISA實驗中,有著多項過程,一起也是有多條留意事項的,在這些個事項中,洗刷是一個決定成敗的過程,這在上篇文章中我們簡略的介紹過,今天我們來細致的分析。通蔚試劑(上海)在這兒共享,
elisa試劑盒運用留意!
ELSIA就是靠洗刷來到達分離游離的和結合的酶符號物的意圖,經過洗刷以鏟除殘留在板孔中沒能與固相抗原或抗體結合的物質,以及在反響過程中非特異性地吸附于固相載體的攪擾物質。聚苯乙烯
等 塑料對蛋白質的吸附是普遍性的,而在洗刷時又應把這種非特異性吸附的攪擾物質洗刷下來。可以說在ELISA操作中,洗刷是*首要 的關鍵技術,應引起操作者的高度重視,操作者應嚴厲按要求洗
滌,不得馬虎。洗刷的方法除某些ELISA儀器配有特別的自動洗刷儀外,手工操作有浸泡式和流水沖刷式兩種,過程如下:
1、浸泡式
a 吸干或甩干孔內反響液;b 用洗刷液過洗一遍(將洗刷液注滿板孔后,即甩去);c 浸泡,即將洗刷液注滿板孔,放置1-2分鐘,間歇搖擺,浸泡時刻不可隨意縮短;d 吸干孔內液體。吸干應徹
底,可用水泵或真空泵抽吸,也可甩去液體后在清潔毛巾或吸水紙 上拍干;e 重復操作c和d,洗刷3-4次(或按闡明規定)。在間接法中如本底較高,可增加洗刷次數或延伸浸泡時刻。
微量滴定板多選用浸泡式洗刷法。洗刷液多為含非離子型洗刷劑的中性緩沖液。聚苯乙烯載體與蛋白質的結合是疏水性的,非離子型洗刷 劑既含疏水基團,也含親水基團,其疏水基團與蛋白質的疏
水基團借疏水鍵結合,從而削弱蛋白質與固相載體的結合,并借助于親水基團 和水分子的結合作用,使蛋白質回復到水溶液狀態,從而脫離固相載體。洗刷液中的非離子型洗刷劑一般是吐溫 20,其濃
度可在0.05%-0.2%之間,高于0.2%時,可使包被在固相上的抗原或抗體解吸附而減低實驗的靈敏度。
2、流水沖刷式
*初用于小珠載體的洗刷,洗刷液僅為蒸餾水甚至可用自來水。洗刷時附接一特別裝置,使小珠在流水沖擊下不斷地滾動淋洗,持續沖刷2分鐘后,吸干液體,再用蒸餾水浸泡2分鐘,吸干即可。浸
泡式猶如盆浴,流水沖刷式則好比淋浴,其洗刷效果更為*,且也簡潔、快速。已有實驗標明,流水沖刷式同樣也適用于微量滴定板的洗刷。洗刷時設法加大水流量或加大水壓,讓水流沖擊板孔表
面,洗刷效果更佳。
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