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SMMC-7721-LUC人肝癌細胞-熒光素酶標記培養(yǎng)說明書

來源:上海琛藝實業(yè)有限公司   2019年08月19日 07:36  

上海琛藝實業(yè)有限公司經過數年的努力發(fā)展已迅速成為集產品研發(fā)、生產、經營為一體的專業(yè)化生物工程公司。公司新引進細胞上千株,其中人的已通過STR鑒定的有幾百株,歡迎各位選購。。。。。。

產品名稱:SMMC-7721-LUC人肝癌細胞-熒光素酶標記說明書
規(guī)格:70%密度的25cm2培養(yǎng)瓶的細胞一瓶
特點:細胞代數為4代以內,細胞耐藥倍數8倍以上;
包裝:內層無菌自封袋;防壓泡沫盒;外層防壓保溫氣泡袋;說明書
細胞來源:ATCC、sciencell、ICLC
貨期:1-2周
運輸方式:快遞運輸
售后:收到細胞后12天,如發(fā)現(xiàn)細胞有質量問題(如污染,死亡,快遞運輸等原因)時,應出具書面質量問題報告并及時通知銷售人員,我們將盡快為您解決!

  • SMMC-7721-LUC人肝癌細胞-熒光素酶標記說明書
  • 三、細胞生長條件:

 

細胞系特征

細胞株名稱:PATU-8988/FU人胰腺癌氟尿嘧啶耐藥株種屬:智人

組織來源:人胃癌

生長特性:懸浮生長

微生物及支原體檢測:陰性

安全性:所有腫瘤和病毒轉染的細胞均視為有潛在的生物危害性,必須在二級生物安全臺內操作,并請注意防護,所有廢液及接觸過此細胞的器皿需高壓滅菌后方能丟棄。

培養(yǎng)條件:

 

 

 

*培養(yǎng)基:90%RPMI-1640+10%胎牛血清+0.1ug/ml FU

GIBCOFBS-10099-141或HYCLONEFBS-SH30084.03。

培養(yǎng)條件:37.0C  carbon dioxide(CO2),5%

傳代方法:

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

收到細胞后,在倒置鏡下(是在4X物鏡)觀察整個細胞生長情況。

(一)如果細胞未長滿,用75%酒精噴灑整個瓶消毒后放到超菌臺內,嚴格無菌操作,低速離心,打開細胞培養(yǎng)瓶,吸出培養(yǎng)液(注意不要吸出細胞),換 10ml新鮮培養(yǎng)液后繼續(xù)培養(yǎng)。

(二)如果細胞已長滿,即可進行傳代培養(yǎng)。具體步驟如下:

1. 低速離心,棄去培養(yǎng)液,用PBS(不含鈣,鎂離子)洗1-2次。

2. 按6-8ml/瓶補加*培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出一半,分到新的培養(yǎng)瓶中(補加*培養(yǎng)基至8到10ml)。如果沒有特別說明,收到細胞后的次傳代一般是一傳二。

注:1、觀察細胞在低倍鏡(4或5X物鏡)下進行,否則不能準確判斷細胞的傳代密度。看細胞的形態(tài)請在10X或20X物鏡下。

2、瓶中運輸培養(yǎng)基不能重復再用,請換用加雙抗的新培養(yǎng)基,細胞凍存后,培養(yǎng)基中可不加任何抗生素。

3、有些細胞貼壁不牢,如發(fā)現(xiàn)貼壁細胞有脫落,可離心吹打后接種到新瓶內。

4、收到細胞后,若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細胞有污染,請及時與我們聯(lián)系。

凍存方法:

  凍存液:90%胎牛血清,10%DMSO

  儲存:液氮儲存

琛藝為您解答細胞培養(yǎng)在實驗過程中污染的原因

污染是細胞培養(yǎng)的大敵。預防和避免污染是細胞培養(yǎng)成功的關鍵之一。一開始就要十分重視,防止污染,否則會前功盡棄,不僅浪費時間,而且浪費人力、物力,甚至造成無法彌補的損失。 細胞培養(yǎng)中常見的生物污染類型有 7 種,分別是細菌污染、支原體污染、原蟲污染、黑膠蟲污染、真菌污染、病毒污染以及非細胞污染。他們在細胞培養(yǎng)中污染的特點如下: 

1. 細菌:細菌在普通倒置顯微鏡下為黑色細沙狀,根據感染細菌的不同,可有不同的外形,培養(yǎng)液一般會渾濁變黃,對細胞生長影響明顯。   

2. 支原體:黑色的,好象多為多形,培養(yǎng)液一般培養(yǎng)液一般會渾濁,原體感染,國內血清很多都沒有做支原體陰性檢測,而支原體是牛血清中常見的微生物之一。而且它不能用過濾的辦法除去。支原體感染細胞以后,細胞病變不很明顯,只是慢慢死qu。

3. 黑膠蟲:可以穿透濾膜,也可以通過空氣傳播,低倍下為黑色點狀,高倍下可看見黑色的小蟲游來游去,培養(yǎng)液也是不渾的,一般不會太影響,細胞還是可以用的。常常是細胞生長狀態(tài)良好,且觀測到的運動物無明顯增多,且培養(yǎng)液顏色、透明度無明顯變化,可在同一批號的血清養(yǎng)的細胞中發(fā)現(xiàn)類似現(xiàn)象。對細胞生長狀態(tài)不會有明顯影響,在細胞增殖旺盛之后會自然消失,除更換血清外無須特殊處理。

4. 真菌:一般培養(yǎng)液清亮,不變色,鏡下有絲狀物,有些真菌開始很像死細胞碎片,只是它很多很多的小塊很清楚,象珊瑚狀,不象細胞碎片分不清,慢慢的會長出很細的黑色絲狀物。真菌生長的比較慢,不象細菌那么容易被發(fā)現(xiàn),但是一旦發(fā)現(xiàn)有它的存在細胞就被污染了,也很難救活了。

5. 原蟲:培養(yǎng)液可輕微渾濁,顯微鏡下那些細小的點狀物數量非常多,輕微活動,細胞雖然可以生長但繁殖速度卻明顯減慢,而且細胞狀態(tài)不好,邊緣不清楚,細胞不透亮。他們與細胞可共生但會與細胞爭奪營養(yǎng)。這種共生是非常普遍的,但他們的數量小,細胞站優(yōu)勢所以不會影響到細胞的正常生長,只有當他們到達一定的數量時就會影響到細胞的生長,終形成惡性循環(huán)。

6. 病毒:組織細胞培養(yǎng)過程中,如果沒有除去潛在的病毒,就會產生病毒污染。目前,從原代猴腎細胞的培養(yǎng)中已發(fā)現(xiàn)不少于20種血清性病毒。 盡管病毒污染的細胞不影響原代培養(yǎng),但生產疫苗是不安全的。因此,潛在病毒是細胞大量生產和疫苗、干擾素等生物制品制作中的難題。

7. 非同種細胞污染 :即是細胞交叉污染,由于細胞培養(yǎng)操作時各細胞株所需的器材和溶液沒有嚴格分開,往往會使一種細胞被另一種細胞污染。目前,世界上已有幾十種細胞都被HeLa細胞所污染,致使許多實驗宣告無效。非細胞培養(yǎng)物所造成的化學成分的污染也偶有發(fā)生,大多是由于細胞培養(yǎng)所需物品清洗消毒不*而帶入一些有毒化學物質所致。 

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