濾紙酶可見分光光度法檢測試劑盒實驗方法學:
一、肝素的配制:產品僅用于科研
市售肝素凍干粉140單位/mg,1克瓶裝,每瓶140,000單位,稱取0.1克肝素凍干粉,加生理鹽水5ml,配成2800單位/ml。取50~100μl濕潤管壁,可抗凝人血3~5ml,血液不會凝固。老鼠血易凝固,所以更濃一些。可以取0.1克肝素凍干粉,加3ml生理鹽水溶解后,取50~100μl,可抗凝鼠血2~4ml。
肝素抗凝管的制備:取0.1克肝素凍干粉,加2.5ml生理鹽水。取100μl~150μl滴入塑料或玻璃管中,濕潤管壁,低于80℃小烤箱中(可以用烤面包的小烤箱),橫向轉動,每隔5~10分鐘轉動一次,直至干燥后放入4℃保存,可使2~5ml血液不凝固。
二、血液樣本的收集:
全血根據收集的條件,分成不抗凝和抗凝兩種。同時,不抗凝分離出的上層的液體我們稱之為血清;抗凝分離出的上層的液體我們稱之為血漿。
1、不抗凝收集血清:將收集好的全血,靜置1~2小時,直接低速離心分離出血清待用或保存。
三、測定意義:
纖維素酶是由微生物產生的多組分的酶系,能水解纖維素β-1,4葡萄糖苷鍵生成葡萄糖,濾紙酶是其中的一個組分,研究濾紙酶活力對纖維素酶的研究具有非常重要的意義。
濾紙酶可見分光光度法檢測試劑盒注意事項:
1. 用干凈的鑷子取出濾紙條,帶手套卷成卷放入Ep管底部。
2. 樣本滅活時保證同一批樣本處理時間一致,建議沸水浴十分鐘。
3. 批量樣本測定之前先做1-2個樣本的預實驗,若吸光值超過1.2,建議將樣本用蒸餾水稀釋后再進行測定,計算公式中乘以稀釋倍數。
4. 顯色后取檢測液時注意槍頭不要碰到濾紙條,以免帶入毛狀物,影響測定結果。
酶液提取
1. 組織:按照質量(g):蒸餾水體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g,加入1mL蒸餾水)加入蒸餾水,冰浴勻漿后于4℃,12000rpm離心10min,取上清置于冰上待測。
2. 細胞:按照細胞數量(104個):蒸餾水體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬細胞加入1mL提取液),冰浴超聲波破碎細胞(功率300w,超聲3秒,間隔7秒,總時間3min);然后4℃,12000rpm離心10min,取上清置于冰上待測。
3. 培養液或其它液體:直接檢測。
僅用于科研,不能用于臨床診斷!所有產品僅供科研使用,不得用于人或動物的治療等任何其他用途,不為任何個人提供產品和服務。
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