觸酶試驗酶液制備的實驗步驟

來源：上海欣中生物工程有限公司 2022年10月27日 13:42

　　觸酶試驗是關(guān)于觸酶的一個實驗做法。大多需氧和兼性厭氧菌均產(chǎn)生過氧化氫酶，但鏈球菌屬陰性，故常用此試驗來鑒定。分枝桿菌的鑒別則用耐熱觸酶試驗，結(jié)核分枝桿菌為陰性，戈氏分枝桿菌和地分枝桿菌為陽性。

　　觸酶試驗酶液的制備：

　　1.稱取葉片 0.25g ，加入5倍量的(M/V)pH7.0 的PBS冰浴研磨 15000r/min

　　離心15min取部分上清液經(jīng)適當(dāng)稀釋后用于酶活性測定。

　　2.CAT活性的測定

　　在3ml的反應(yīng)體系中，包括0.3% H2021ml, H20 1.95ml, 最后加入0.05ml酶液

　　啟動反應(yīng)，測定波長240nm處的OD降低速度。將每分鐘OD減少0.01定義為1個活力單位。

　　3.POD活性的測定

　　在3ml的反應(yīng)體系中，包括0.3% H2021ml, .0.2% 愈創(chuàng)木酚0.95ml,pH7.0的PBS 1ml，最后加入0.05ml酶液啟動反應(yīng)，記錄470nm處OD增加速度。將每分鐘OD增加0.01定義為1個活力單位。

　　4. 用考馬斯亮藍 G-250法測定蛋白含量。

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