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活細胞骨架染色：實時觀察3D細胞培養微環境與細胞遷移的互作用2016/07/08

2D細胞外基質（ECMs）的物理特性會影響到細胞的粘附動態和形態，但是3D細胞外基質的局部微環境對細胞的影響卻知之甚少。美國的科研人員構建了幾種3D膠原基質，研究其微結構的變化對于調節3D狀態下的細胞粘附動態和細胞遷移的影響。細胞外基質中有各種成束的纖維會加強局部可粘位點的堅固性，并且可以通過ECM/粘附偶聯點增強細胞的粘附穩定性，并且高度柔軟的網狀聯合促進了粘附的收縮力。3D粘附的動力學由局部的ECM的強度和整合素/ECM還有II型肌球蛋的收縮白共同調節。不同于2D遷移，3D的細胞遷移不僅受E

全內反射熒光顯微實驗TIRF實驗2016/07/04

整合素是一種跨膜蛋白，在介導細胞黏附到細胞外基質（ECM）過程中發揮重要的作用。整合素在和配位體結合并發揮作用之前需要被激活。Kindlin和talin如何在非造血細胞中介入激活整合素這一過程的原理并不十分清晰。美國的科研人員發現缺少成纖維細胞，talin或kindlin都不能激活β1整合素，從而不能粘附到纖維粘聯蛋白表面上；甚至不能由Mn2+介導的整合素粘連構象發生轉變。使用Mn2+可以激活talin而不是kindlin缺陷細胞的部分整合素功能，使其活化和粘附在纖維粘連蛋白表面上。而具有方向性

通道載玻片--IL-33免疫熒光染色實驗2016/06/20

細胞的免疫熒光實驗是一個基礎的細胞實驗，傳統的方法是在培養板中放入預先處理好的蓋玻片，待細胞貼壁后，使用鑷子將蓋玻片拿出再開始進行固定，染色等系列工作。為了簡化這一工作，一系列底部適合直接成像的細胞耗材應運而生，如圖：日本的科研人員在研究細胞因子IL-33在Ca9-22細胞中免疫熒光染色試驗時使用了一種通道載玻片。IL-33是一種在內皮細胞中常規表達的細胞因子，其參與調節了先天免疫細胞的Th2細胞因子介導的免疫應答。研究人員想研究增強IL-33表達的牙周內皮細胞中牙周菌Porphyromonas

可視的細胞趨化實驗2016/06/17

細胞趨化性（Chemotaxis，亦被稱為化學趨向性）是趨向性的一種，指細胞、細菌及其他單細胞、多細胞生物依據環境中某些化學物質而趨向的運動。趨化性對細胞的發展和其他正常功能一樣*。在生物材料移植的時候，快速的纖維血管化是成功移植的先決條件之一。尿激酶型纖溶酶原激活物（uPA）和組織型纖溶酶原激活物（tPA）或纖溶酶原激活物抑制劑-1（PAI-1）在纖維蛋白溶解中都發揮了重要的作用。這三種蛋白近均被報道在無可溶纖維蛋白的細胞過程中有表現出*的作用，比如細胞粘附，遷移和增殖。德國的科研人員發現使用

免疫熒光實驗iPSC-derive神經元的體外神經毒性檢測2016/06/16

如今神經毒性檢測主要是依賴活體動物實驗，不僅有倫理問題，而且通常非常昂貴并且十分耗時。當需要大規模的測試化合物的時候就不太合適了。因此，高通量的體外的神經毒性測試就顯得十分必要了，而且可以使用人源的細胞直接進行試驗，試驗結果的實用性也更佳。但是，到目前為止，人源干細胞誘導的神經元并沒有適合進行這類試驗的特質，試驗時間較長，批次間差異大，并且有收到倫理和一些法律的制約，使得這種細胞都不太適用于做大規模的體外測試試驗。近，市面上出現了商用的人源iPSC-derive神經元細胞，重復性好，可以用來做這

外分泌體含非編碼RNA影響內皮細胞衰老和血管生成2016/06/16

內皮細胞，內皮祖細胞，基質細胞的信號在血管形成的時候是至關重要的。其中，外分泌體就是其中一種通信方式。有研究發現，外分泌體在免疫應答，腫瘤存活，應激反應和血管生成上的細胞間通信有著非常重要的作用。在外分泌體中有mRNA和miRNA往往會對受體細胞產生影響。荷蘭的研究人員對外分泌體內的microRNAmiR-214的研究發現，含有miR-214的外分泌體能夠抑制受體細胞的內皮細胞的衰老，并且促進血管生成的發生。與此同時，其還會抑制毛細血管失調癥突變體ataxiaangiectasiamutated

活細胞骨架染色中的應用2016/06/06

Actin-肌動蛋白是細胞骨架*的一個組成部分，其在很多基礎的細胞活動中扮演著非常重要的角色。尤其在細胞形態，遷移和研究細胞機制中，肌動蛋白都是一個非常理想的觀測蛋白。肌動蛋白是由小球狀的G-actin聚合成絲狀的F-actin動態交互變化構成的，從而參與了細胞活動中的各種細胞骨架的變化。通常研究活細胞中actin的活動用的是轉染actin-GFP融合蛋白的質粒，可以同時標記F-actin和G-actin，可以有效的反映出細胞骨架的相對活性，但是當值需要觀測F-actin的時候，使用actin-

環形細胞侵襲實驗--使細胞侵襲的過程可視化2016/06/03

腫瘤細胞的侵襲能力是腫瘤轉移的一個重要特征。為了研究腫瘤細胞侵襲過程的機制，一系列體外細胞實驗建立起來，用于研究細胞侵襲基底膜和基質的過程。體外侵襲實驗首先是采用人工重構基底膜材料Matrigel，可以在37℃逐漸凝固成膠，結構與天然基質膜結構極為相似。通常的實驗是在孔徑8μm的濾膜上鋪上一層Matrigel，細胞不能自由穿過，必須分泌水解酶，并通過變形運動才能穿過。實驗之后通過對穿過“基質膜”的細胞進行計數，來確定細胞的侵襲能力。這一方法非常仿真的模擬了細胞在生物狀態下的侵襲過程，但是其也有一

甲狀腺轉錄因子-1（TTG-1）影響肺癌細胞血管生成2016/06/03

美國的科研人員通過對TTF-1的調控發現，TTF-1能直接調節血管內皮生長因子（VEGF），并且發現VEGF啟動子上有多處TTF-1響應序列。比如，VEGF的主要受體，VRGFR2顯示出收到TTF-1的直接正調節。本文中顯示，低氧并沒有促進TTF-1+肺癌細胞中的VEGF的表達。而采用外泌體培養基或者是去外泌體的培養基（EDM）時，TTF-1都能促進VEGF表達。但在研究中意外的發現TTF-1+肺癌細胞的去外泌體培養基（EDM-TTF-1+）能夠內皮細胞的血管形成。研究人員采用HUVECs，鋪在

3D細胞培養--子宮內膜基質細胞eSCs和腫瘤血管內皮細胞2016/05/26

Eph和ephrin蛋白在協調細胞、細胞導向、細胞與細胞之間的相互作用中發揮著非常重要的作用，與發展的組織模式和器官和血管生成都有關系。Eph家族成員在人類腫瘤的發展過程中有著非常關鍵功能，在正常的子宮內膜的血管化再生組織和人子宮內膜具有多向分化潛能的間充質干細胞（EMSC）有能檢測到Eph家族的蛋白表達，而其他高度血管化的人體器官卻沒有Eph的表達。澳大利亞的科學家發現，將EphA3+orEphA3-depletedeSCs和tumour-derivedendothelialcells(TEC

傷口愈合實驗-干細胞侵襲2016/05/26

傷口愈合實驗是體外研究細胞遷移的的一個有用的實驗。原理是人為的在鋪板的單層細胞中制造一個空白的無細胞的地帶，然后對這個無細胞地帶的邊緣的細胞進行觀察；這些邊緣的細胞會開始進行遷移活動，并且終覆蓋整個無細胞的區域，重新互相接觸在一起。法國的科研人員在2015年的STEMCELL上發的文章中提出神經生長因子（NGF）和神經生長因子前體（proNGF）會自動的激活乳腺癌干細胞，并且發生侵襲。文中，使用乳腺癌細胞系和腫瘤分離的細胞進行傷口愈合實驗，得出，由NGF處理的腫瘤離的乳腺癌細胞的傷口愈合速率有非

細胞趨化實驗細胞 對高濃度的IIIA4有負趨向行為2016/05/24

細胞趨化性（Chemotaxis，亦被稱為化學趨向性）是趨向性的一種，指細胞、細菌及其他單細胞、多細胞生物依據環境中某些化學物質而趨向的運動。趨化性對細胞的發展和其他正常功能一樣*。EphA3在間充質細胞（eMSCs）中發現表達，但沒有在其他的血管連接組織有表達。澳大利亞的科研人員發現在人間充質細胞（MSCs）中表達的EphA3能夠在成人血管生成的早期發揮作用。在研究MSCs細胞對于血管生成的信號相應的實驗中，研究人員使用過表達EphA3的MSCs處于EphA3的一個“興奮劑”IIIA4的一個穩

鈣離子成像顯著增強了B細胞受體介導的Ca2+活動2016/05/23

在生物有機體內，鈣離子傳遞了各種各樣的胞內信號，這些信號幾乎在每種類型的細胞中都存在，而且在很多方面都有非常重要的作用。在很多細胞活動的時候，胞內鈣離子的濃度會顯著升高。鈣離子成像是利用鈣離子特異染料，將細胞中的鈣離子濃度通過熒光強度表現出來，從而達到檢測細胞活動的目的。德國的科學家通過研究B細胞胞質中鈣離子濃度來研究RhoGTPaseRac對于B細胞功能的重要影響，研究發現，RacPLCγ2可以通過增強胞漿內的Ca2+濃度來影響B細胞受體（BCR）發揮作用。文中，研究人員用BCR和Ca2+分別

細胞共培養--CD34前體干細胞對內皮細胞團的旁分泌影響2016/05/17

細胞共培養實驗是將2種或2種以上的細胞共同培養在同一環境中的實驗，更好的模擬體內細胞互相通信的生理情況。一般有兩種共培養方法：1）直接接觸共培養體系：是指直接將2種或2種以上的細胞按照一定比例混合，鋪在一個孔中；2）間接接觸共培養體系：是指將不同種類的細胞共用一種培養環境，而不互相接觸，查看細胞分泌因子對另外的細胞的影響。這里我們介紹的是采用間接接觸共培養的方法，研究CD34祖細胞的分泌物對由內皮細胞組成的細胞團在血管形成上的影響。文中，研究人員將CD34祖細胞和內皮細胞團共培養后發現，CD34

細胞剪切力實驗2016/05/16

生物體內存在的機械力，比如流體剪切力對內皮細胞有著非常多的影響。在血管中，不規則的亂流通常和血管的疾病（比如，動脈粥樣硬化）是相關的，并且能直接影響內皮細胞的分化和凋亡。因此，2015年，瑞士的一個研究小組在淋巴管中研究不規則的剪切力的作用中發現，不規則的剪切力和轉錄因子FOXC2共同在在淋巴管形成中有著非常關鍵的作用。在體外培養的淋巴管內皮細胞中，FOXC2受到振蕩剪切力的刺激會高表達，并且增強細胞間的，降低細胞的增殖率；而FOXC2的失活會使細胞對不規則的剪切力敏感，使細胞連接分解并且促進細

細胞成團和細胞出芽實驗2016/05/12

導言近幾年來，3D（threedimensional）細胞培養系統開始成為生物學研究新的研究方法。使用3D系統培養系統能更好的模擬生物體內的真實生理環境，而2D（傳統的貼壁培養）細胞培養系統不能有效的模擬細胞在生物體內的生理環境。3D細胞技術有很多種方法，使用多細胞形成的細胞團是其中主要的研究應用之一。細胞團是微小的細胞聚集簇，可以用來研究3D情況下向外生長的情況（細胞出芽）。一.實驗原理目前有幾種方法可以用來生成細胞團。所有方法的原理都是防止細胞貼壁，并且創造環境增強臨近細胞間的細胞外基質的粘

共聚焦成像——如何讓細胞在玻璃底培養皿更好地貼壁2016/05/11

很多童學做共聚焦成像的時候都會遇到細胞貼壁難的問題。今天分享下如何處理玻璃底培養皿、如何選擇玻璃底培養皿，讓細胞妥妥地貼壁，大家做共聚焦時候能夠更得心應手。市面上常見的玻璃底培養皿，通常是在塑料培養皿底部打個洞，再將厚度為170-220μm的蓋玻片或細胞爬片用無影膠水或硅膠粘于培養皿底部。并不是整個培養皿的底部都是玻璃材質的。適用于觀測的區域僅僅在打孔的區域。但是由于玻璃的疏水性，往往在培養細胞的時候，細胞不能在玻璃上很好地貼壁，生長狀態并不好，甚至在做共聚焦掃描成像的時候發生細胞脫片的現象。圖

通道載玻片--新的免疫熒光方法2016/05/11

細胞的免疫熒光實驗是一個基礎的細胞實驗，傳統的方法是在培養板中放入預先處理好的蓋玻片，待細胞貼壁后，使用鑷子將蓋玻片拿出再開始進行固定，染色等系列工作。現在分享一種簡便的免疫熒光方法，無需爬片，培養-操作-鏡檢，在一個培養皿/載玻片上完成所有工作！一氣呵成！使用如圖的培養皿和載玻片，免疫熒光步驟將簡化為：1.直接細胞培養2.沖洗玻片/培養皿3.固定細胞4.沖洗玻片/培養皿5.染色6.沖洗玻片/培養皿7.凍存液處理細胞8.直接鏡檢觀察免去了指甲油封片的傳統免疫熒光方法中的冗長步驟：1.無需對蓋玻片

激光共聚焦實驗的樣品準備方法對比2016/05/05

激光共聚焦實驗的樣品準備方法對比——無需細胞爬片的樣品準備新方法VS傳統方法激光共聚焦顯微鏡可以觀察到細胞內已經標記好的蛋白質和分子，為生物學研究提供了更直觀的觀測方法。如今，激光共聚焦成像已經是一個非常常規的實驗操作，應用于生物學各個研究領域中。在細胞實驗中，如果要進行一次激光共聚焦成像，除了要知道相關的顯微鏡參數設置和操作以外，樣品的準備也是非常重要的一環。傳統方法由于激光共聚焦實驗對觀測耗材的底部有著比較高的要求，普通的培養皿，培養板或者培養瓶都不能直接用于激光共聚焦成像。1.比較常用的是

探討流體剪切力對細胞活動的影響2016/05/05

探討流體剪切力對細胞活動的影響--流體剪切力對細胞吸收人造細胞器的影響丹麥奧胡斯大學的納米科學近日在SMALL雜志上發表了一篇關于納米材料作為有細胞活性人造細胞器的文章。文章介紹了個有趣的現象：細胞在剪切力條件下培養的時候，會吸收更多的納米顆粒，并且沒有附加的細胞毒性。文章中采用了內皮細胞和巨噬細胞做為實驗細胞。將細胞培養在ibidi通道載玻片中，之后使用含有納米顆粒的培養基，以一定的剪切力刺激細胞，細胞吸收的納米顆粒的量比靜置狀態下有顯著的升高。分享一下這個實驗的細節，或許大家可以從中找到自己