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RIPA裂解液使用問題看這篇就夠了！2023/07/21: 1.什么是RIPA裂解液？RIPA裂解液（RadioImmunoprecipitationAssayLysisbuffer，放射免疫沉淀法裂解緩沖液）是一種傳統(tǒng)的可用于裂解細(xì)胞或組織的快速裂解液，其原理為利用表面活性劑等裂解細(xì)胞膜（包括核膜），從組織或細(xì)胞中抽取可溶性蛋白。RIPA裂解液裂解后得到的蛋白一般可直接用于常規(guī)的WB、IP、co-IP等實驗。2.RIPA裂解液里有什么？RIPA裂解液的配制方法有很多種，主要包括裂解成分、蛋白酶抑制劑和磷酸酶抑制劑三種組分。裂解成分可通過破壞細(xì)胞膜和蛋白

WB試驗中常用細(xì)胞裂解液及酶抑制劑介紹2023/07/21: 1、細(xì)胞裂解液細(xì)胞裂解液作用：(1)利用去污劑破壞脂質(zhì)雙分子層，破裂細(xì)胞；(2)溶解蛋白；(3)蛋白變性使其穩(wěn)定；(4)抑制蛋白酶活性。細(xì)胞裂解成分一般使用的是表面活性劑，常用的有曲拉通X-100（TritonX-100）、脫氧膽（deoxycholate）、乙基苯基聚乙二醇（NonidetP40，NP-40）、十二烷基磺酸鈉（SDS）。其中TritonX-100和NP-40為非離子型，deoxycholate和SDS為離子型。不同裂解成分的裂解強度不同，一般來說TritonX-100和SDS的

標(biāo)準(zhǔn)品的制備、鑒定、與計量說明2023/07/20: 一、標(biāo)準(zhǔn)品的制備標(biāo)準(zhǔn)品的制備是非常復(fù)雜的問題，也是標(biāo)記免疫分析中比較難于制備的一個成分。以下討論的是實驗室標(biāo)準(zhǔn)品(或商品化試劑中標(biāo)準(zhǔn)品)的制備。（1）基質(zhì)的制備：如前所述，作為標(biāo)準(zhǔn)品的介質(zhì)(基質(zhì))成分應(yīng)與被測樣品相同。對大多數(shù)用于測定血清中某物質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)品，應(yīng)用不含被測物質(zhì)的零血清制備，以求反應(yīng)的介質(zhì)環(huán)境相當(dāng)。但有時零值血清的制備十分困難，所以有些標(biāo)準(zhǔn)品用適當(dāng)?shù)木彌_液制備，并在緩沖液中加入一定量的載體蛋白(一般用1%～2%的牛血清白蛋白)，以便使其與樣品的介質(zhì)環(huán)境相近。零值血清的制備方法有：A、吸

免疫定量分析中標(biāo)準(zhǔn)品的制備要求2023/07/20: 標(biāo)準(zhǔn)品是標(biāo)記免疫分析定量的依據(jù)。標(biāo)準(zhǔn)品的正確與否直接影響樣品的測定結(jié)果。如果在連續(xù)測定中，或各實驗室之間使用的標(biāo)準(zhǔn)品不一致，則可影響到實驗結(jié)果的可比性。為此，對標(biāo)記免疫分析所使用的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)滿足如下要求。1、化學(xué)結(jié)構(gòu)：原則上標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)與被測物具有wan全相同的化學(xué)結(jié)構(gòu)，包括相同的立體化學(xué)結(jié)構(gòu)。但在實際工作中，用化學(xué)結(jié)構(gòu)wan全相同的物質(zhì)作標(biāo)準(zhǔn)品是十分困難的。這是由于一方面來源有限，另一方面有些被測物本身的化學(xué)結(jié)構(gòu)還不清楚，或是有明顯的異型性。所以有時也用結(jié)構(gòu)類似的物質(zhì)作標(biāo)準(zhǔn)品。此時，應(yīng)充分了解這些物

溶菌酶的制備原理和操作方法2023/07/19: 實驗概要本實驗介紹了溶菌酶（lysozyme）的制備及其性質(zhì)測定的原理和操作方法。實驗原理溶菌酶（lysozyme）是由弗萊明在1922年發(fā)現(xiàn)的，它是一種有效的抗菌劑，全稱為1，4-β-N-溶菌酶，又稱作粘肽N-乙?；邗Ｋ饷富虬谫|(zhì)酶?；钚灾行臑樘於彼?2和谷氨酸35，是一種糖苷水解酶，能催化水解粘多糖的N-乙酰氨基葡萄糖（NAG）與N-乙酰胞壁酸（NAM）間的β-1，4糖苷鍵，相對分子質(zhì)量14700Da，由129氨基酸殘基構(gòu)成，由于其中含有較多堿性氨基酸殘基，所以其等電點高達10.8左

細(xì)菌的接種與分離技術(shù)方法介紹2023/07/19: （一）平板劃線分離法在被檢標(biāo)本中，?；祀s有多種細(xì)菌，平板劃線分離法可使這多種細(xì)菌在培養(yǎng)基表面分散生長，各自形成菌落，以便根據(jù)菌落的形態(tài)及特征，挑選單個菌落進行純培養(yǎng)。常用的平板劃線分離法有以下兩種：1.連續(xù)劃線分離法此法主要用于雜菌不多的標(biāo)本。用接種環(huán)取標(biāo)本少許，于平板1/5處密集涂布，然后來回作曲線連續(xù)劃線接種，線與線間有一定距離，劃滿平板為止。2.分區(qū)劃線分離法本法適用于雜菌量較多的標(biāo)本。先將標(biāo)本均勻涂布于平板表面邊緣一小區(qū)（第一區(qū)）內(nèi)，約占平板1/5面積，再在二、三、……區(qū)依次連續(xù)劃線。每

藥物雜質(zhì)的分類和研究規(guī)范2023/07/18: 藥物雜質(zhì)因其可能對藥品質(zhì)量、安全性和有效性產(chǎn)生影響，目前成為國內(nèi)外藥品監(jiān)管機構(gòu)的重點關(guān)注內(nèi)容之一。那么，你知道藥物雜質(zhì)都是怎么劃分的嗎？接下來跟著遠(yuǎn)慕一起了解一下。雜質(zhì)控制要合理，即合理地確定雜質(zhì)檢查項目與限度，合理地選擇雜質(zhì)檢查方法。有機雜質(zhì)在藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中的項目名稱：1、以雜質(zhì)的化學(xué)名稱作為項目名稱當(dāng)被檢查的雜質(zhì)是已知化合物時(特定雜質(zhì))，就以該化合物的化學(xué)名稱作為質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中的項目名稱。例如:卡比馬唑及其片劑中的“甲巰咪唑',阿司匹林中的“游離水楊酸”、磷酸可dai因中的“ma啡”等。如果雜

實驗室數(shù)據(jù)誤差造成原因及解決方法2023/07/18: 在日常檢測中，有的時候雖然我們的檢測方法優(yōu)良，儀器設(shè)備檢定合格，環(huán)境條件滿足檢測要求，檢測員技術(shù)嫻熟，但是，往往得到的檢測結(jié)果卻不可能是絕對準(zhǔn)確的。即使是同一個檢測人員對同一個檢測樣品、對同一項檢測項目進行多次檢測，得到的結(jié)果也不會wan全相同，總會產(chǎn)生各種不同的差別，換句話說，任何項目的檢測都不可能是絕對準(zhǔn)確的，測得值與真實值之間總是或多或少的存在著差別，即誤差。1、實驗室表示誤差的常用術(shù)語有哪些準(zhǔn)確度測量結(jié)果與真實值之間一致的程度。（測量結(jié)果與真實值差值越小，準(zhǔn)確度越高）準(zhǔn)確度只是一個定性概

實驗室試劑變質(zhì)還能用嗎？如何預(yù)防化學(xué)試劑變質(zhì)2023/07/17: 實驗室試劑在開啟后受到空氣、水分、光照和溫度的影響會發(fā)生物理化學(xué)變化，發(fā)生變質(zhì)。一個實驗室，難免會有或多或少過期的化學(xué)試劑。過期的試劑還可以使用嗎？一般情況下，化學(xué)試劑的保質(zhì)期為1-2年，有些性質(zhì)穩(wěn)定的保存期就長點，這取決于正確的保存方法。這就需要考慮存儲條件是否符合說明書上的要求，例如溫度、光照和濕度等，對于那些沒有明確存儲條件的試劑，更要注意存儲條件，通常高溫、暴曬和高濕度，非常容易造成產(chǎn)品的失效。未開啟的化學(xué)試劑，保質(zhì)期到了未必就不能用。如果你之前能夠記錄周圍環(huán)境的變化，特別是遇到一些ji

實驗室細(xì)胞培養(yǎng)被污染的處理方法2023/07/17: 實驗室細(xì)胞培養(yǎng)中常見的生物污染包括細(xì)菌污染、霉菌污染、支原體污染、黑點污染、真菌污染和原生動物污染。1.細(xì)菌污染細(xì)菌在普通倒置顯微鏡下呈黑色和細(xì)砂狀。根據(jù)感染菌的種類不同，可能會呈現(xiàn)不同的形狀，培養(yǎng)液一般會變得渾濁、黃色，對細(xì)胞生長有明顯影響。2.霉菌污染正常情況下，培養(yǎng)基在37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)兩三天，在倒置顯微鏡下仍保持透明，無雜質(zhì)。一旦出現(xiàn)絮狀雜質(zhì)，顯微鏡下可見絲狀和團塊狀漂浮物，菌絲明顯。此時，雖然細(xì)胞仍在生長，但它們的生命狀態(tài)會在長時間后逐漸惡化。3.支原體污染支原體是隱蔽的污染物，不能通

化學(xué)試劑中液體試劑取用規(guī)則2023/07/14: 化學(xué)試劑按照形態(tài)的差異分為固體、液體、粉末、顆粒等不同種類，針對不同的試劑需要選用符合其特性的試劑瓶，所以試劑在取用時也會有所差別。為了防止試劑灑出來，同時避免試劑揮發(fā)，液體試劑主要存放在瓶口較小的細(xì)口瓶中，取用時遵循以下規(guī)則：1、用少量液體試劑時，常使用膠頭滴管吸取，用量較多時則采用傾瀉法。2、從細(xì)口瓶中將液體傾入容器時，把試劑瓶上貼有標(biāo)簽的一面握在手心，另一手將容器斜持、并使瓶口與容器口相接觸，逐漸傾斜試劑瓶，倒出試劑。3、試劑應(yīng)該沿著容器壁流入容器，或沿著潔凈的玻棒將液體試劑引流入細(xì)口或平

瓊脂糖凝膠濃度選擇與平均孔徑的關(guān)系2023/07/14: 瓊脂糖凝膠電泳儀是以瓊脂糖凝膠作為載體的電泳，廣泛用于核酸研究。瓊脂糖凝膠屬于大孔膠，可分析分子量為107的大分子，這種大孔特性有利于免疫電泳和微量制備。瓊脂糖形成凝膠后孔徑的大小取決于瓊脂糖凝膠濃度，瓊脂糖凝膠濃度與平均孔徑的關(guān)系如下：一、瓊脂糖凝膠濃度為0.075%時，平均孔徑為800nm。二、瓊脂糖凝膠濃度為0.16%時，平均孔徑為500nm。三、瓊脂糖凝膠濃度為1%時，平均孔徑為150nm。四、瓊脂糖凝膠濃度為2%時，平均孔徑為20nm。瓊脂糖凝膠的濃度選擇：目的產(chǎn)物大小80BP的片段，

固定化細(xì)胞的原理及固定化酶應(yīng)用介紹2023/07/13: 細(xì)胞的種類多種多樣，大小和特性個不相同，故此細(xì)胞固定化的方法有很多種。歸結(jié)起來，主要可以分為吸附法和包埋法兩大類。吸附法利用各種吸附劑，將細(xì)胞吸附在其表面而使細(xì)胞固定的方法稱為吸附法。用于細(xì)胞固定化的吸附劑主要有硅藻土、多孔陶瓷、多孔玻璃、多孔塑料、金屬絲網(wǎng)、微載體、和中空纖維等。酵母細(xì)胞帶有負(fù)電荷，在pH3~5的條件下能夠吸附在多孔陶瓷、多孔塑料等載體的表面，制成固定化細(xì)胞，用于酒精和啤酒等的發(fā)酵生產(chǎn)；在環(huán)境保護領(lǐng)域內(nèi)使用的活性污泥中含有各種各樣的微生物，這些微生物可以沉積吸附在硅藻土、多孔玻

間苯二酚分析實驗的試劑制備方法2023/07/13: 一、溴滴定液（0.05mol/L）配制：取溴酸鉀3.0g與xiu化鉀15g，加水適量使溶解成1000mL，搖勻。標(biāo)定：精密量取本液25mL，置碘瓶中，加水100mL與碘hua鉀2.0g，振搖使溶解，加鹽酸5mL，密塞，振搖，在暗處放置5分鐘，用硫代liu酸鈉滴定液（0.1mol/L）滴定至近終點時，加淀粉指示液2mL，繼續(xù)滴定至藍色消失。根據(jù)硫代硫酸鈉滴定液（0.1mol/L）的消耗量，算出本液的濃度，即得。室溫在25℃以上時，應(yīng)將反應(yīng)液降溫至約20℃。本液每次臨用前均應(yīng)標(biāo)定濃度。貯藏：置玻璃塞

【技術(shù)干貨】PCR實驗中常見問題及解決方案2023/07/12: 聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）是一種用于放大擴增特定的DNA片段的分子生物學(xué)技術(shù)，它可看作是生物體外的特殊DNA復(fù)制，PCR的最大特點是能將微量的DNA大幅增加。我們進行核酸擴增時，經(jīng)常會不定的出現(xiàn)一些異常問題，那么遇到這些問題該怎么解決呢？接下來跟著遠(yuǎn)慕一起來看看前輩們的經(jīng)驗。沒有ct值檢測結(jié)果遇到?jīng)]有Ct值情況,排查是否有以下問題:1.循環(huán)數(shù)不夠(一般不超過45循環(huán)，不僅背景值提高,定量也不準(zhǔn));2.PCR程序設(shè)置錯誤,檢測熒光信號的步驟有誤。一般SG法采用72℃延伸時采集，TaqMan法則一般在

動物血清的區(qū)分比較與作用2023/07/12: 血清主要作用是提供基本營養(yǎng)物質(zhì)、提供激素和各種生長因子、提供結(jié)合蛋白、提供促接觸和伸展因子使細(xì)胞貼壁免受機械損傷、對培養(yǎng)中的細(xì)胞起到某些保護作用。由于血清來源于動物，且含有細(xì)胞培養(yǎng)中所需的各種營養(yǎng)（血漿蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生長因子、激素、無機物等），這奠定了血清是細(xì)胞培養(yǎng)實驗中最pu遍的試劑的基礎(chǔ)。市面上的牛血清產(chǎn)品名稱雖然五花八門，但根據(jù)其不同的特性，追其根本，但大致可分為以下四種。根據(jù)牛的取血年齡可以區(qū)分：胎牛血清（FoetalBovineSerum，簡稱FBS）指的是取自未出生，

實驗室培養(yǎng)基pH值監(jiān)控的注意事項2023/07/11: pH值是培養(yǎng)基的常規(guī)監(jiān)控項目，微生物的生長不僅依賴豐富的營養(yǎng)，還需要在適宜的pH值范圍內(nèi)才能正常生長繁殖或體現(xiàn)其生物特性，因此培養(yǎng)基pH值是否符合要求直接影響微生物檢驗結(jié)果。1、培養(yǎng)基配置：配料—溶解—調(diào)PH—過濾—分裝—包扎—滅菌—擺斜面—貯存1.配料配方換算→在容器中加入少量水（蒸餾水，自然水）→按照配方稱取各種藥品（依次加入）→加足所需水量（一藥一勺，取藥后立即蓋上瓶蓋）。2.溶解淀粉溶解：少量冷水調(diào)成糊狀加熱溶解，特別是加有瓊脂的培養(yǎng)基，一定要煮沸，瓊脂的熔解溫度95-97℃，且需要邊加

關(guān)于PCR常見問題與解決方法！2023/07/11: 01、PCR產(chǎn)物的電泳檢測時間一般為48h以內(nèi)，有些最好于當(dāng)日電泳檢測，大于48h后帶型不規(guī)則甚致消失。02、假陰性，不出現(xiàn)擴增條帶PCR反應(yīng)的關(guān)鍵環(huán)節(jié)有①模板核酸的制備②引物的質(zhì)量與特異性③酶的質(zhì)量及活性④PCR循環(huán)條件。尋找原因亦應(yīng)針對上述環(huán)節(jié)進行分析研究。一、模板1、模板中含有雜蛋白質(zhì)2、模板中含有Taq酶抑制劑3、模板中蛋白質(zhì)沒有消化除凈，特別是染色體中的組蛋白4、在提取制備模板時丟失過多，或吸入酚5、模板核酸變性不徹di。在酶和引物質(zhì)量好時，不出現(xiàn)擴增帶，極有可能是標(biāo)本的消化處理，模板

蛋白質(zhì)、多肽液相色譜純化方法簡介2023/07/10: 1、純化的一般目標(biāo)和方法首先，自然來源或者重組表達的蛋白質(zhì)經(jīng)過一些粗提的步驟(例如：勻漿、離心、硫酸銨沉淀等)成為穩(wěn)定的可以用于色譜分離的樣品。然后進行捕獲色譜(capturechromatography)，主要目標(biāo)是濃縮和去除大量的容易去除的雜質(zhì)，此步最關(guān)心的是流速和載量，常采用高載量、快流速凝膠。經(jīng)過濃縮的部分純化的樣品進行中級色譜(intermediatechromatography)，目的是去除較難去除的雜質(zhì)，此步最關(guān)心的是分辨率，常采用高分辨率的細(xì)顆粒凝膠。最后為了得到符合要求的最終產(chǎn)

真菌的DNA和RNA提取方法介紹2023/07/10: 一、真菌DNA的提取(方法一)1.實驗試劑(1)DNA提取液:0.2MTris-HCl(pH7.5),0.5MNaCl,0.01MEDTA,1％SDS(2)3MNaAc(3)TE:10mmol/LTris-HClpH8.0,1mmol/LEDTA(4)酚(pH8.0):氯仿:異戊醇(25:24:1)(5)氯仿:異戊醇(24:1)(6)異丙醇(7)無水乙醇(8)75%乙醇(9)RNaseA2.實驗步驟(1)取真菌菌絲0.5g,在液氮中迅速研磨成粉(2)加入4mL提取液,快速振蕩混勻(3)加入等體積

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