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上海遠慕生物科技有限公司
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大腸桿菌在生物技術中的應用2023/05/17
大腸桿菌作為外源基因表達的宿主,遺傳背景清楚,技術操作簡單,培養條件簡單,大規模發酵經濟,倍受遺傳工程專家的重視.目前大腸桿菌是應用最guang泛,最成功的表達體系,常做高效表達的首shou選體系真核基因在大腸桿菌中表達,必須有合適的表達載體(Vector),常用載體:pBV220,pET系統目的基因在大腸桿菌中表達的情況:大腸桿菌更適合原核基因的表達,外源基因表達產量與單位體積產量是正相相關的,而單位體積產量與細胞濃度和每個細胞平均表達產量呈正相相關.細胞濃度與生長速率,外源基因拷貝數和表達產
大腸桿菌菌株的分型與區別介紹2023/05/17
1:DH5a菌株DH5a是一種常用于質粒克隆的菌株。E.coliDH5a在使用pUC系列質粒載體轉化時,可與載體編碼的β-半乳糖苷酶氨基端實現α-互補。可用于藍白斑篩選鑒別重組菌株。基因型:F-,φ80dlacZΔM15,Δ(lacZYA-argF)U169,deoR,recA1,endA1,hsdR17(rk-,mk+),phoA,supE44,λ-,thi-1,gyrA96,relA12:BL21(DE3)菌株該菌株用于高效表達克隆于含有噬菌體T7啟動子的表達載體(如pET系列)的基因。T7
平板菌落計數法的優缺點說明2023/05/17
一、平板劃線分離法由接種環以菌操作沾取少許待分離的材料,在無菌平板表面進行平行劃線、扇形劃線或其他形式的連續劃線,微生物細胞數量將隨著劃線次數的增加而減少,并逐步分散開來,如果劃線適宜的話,微生物能一一分散,經培養后,可在平板表面得到單菌落。二、稀釋倒平板法先將待分離的材料用無菌水作一系列的稀釋(如1∶10、1∶100、1∶1000、1∶10000…),然后分別取不同稀釋液少許,與已溶化并冷卻至45℃左右的瓊脂培養基混合,搖勻后,傾入滅過菌的培養皿中,待瓊脂凝固后,制成可能含菌的瓊脂平板,保溫培
營養瓊脂(NA)和平板計數瓊脂(PCA)有何區別2023/05/17
根據培養基名稱來看,平板計數瓊脂培養基即PCA,是在08版GB中用于菌落總數測定的,配方:胰蛋白胨0.5%,酵母浸粉0.25%,葡萄糖0.1%,瓊脂1.5%,蒸餾水配制;pH6.8~7.2。營養瓊脂培養基即NA,配方:蛋白胨1%,牛肉膏0.3%,氯化鈉0.5%,瓊脂1.5%~2.0%,蒸餾水配制。pH7.2~7.4。兩者配方成分不一樣,名字也不一樣;但是都是可以用來做菌落總數的測定,所以說這兩者從用途的本質上并沒有太大的區別。但是從實驗結果來看,對于檢測結果,偶爾幾次試驗兩者的區別不大。只是國際
粗提取植物DNA的實驗步驟和原理2023/05/16
提取植物DNA常用的方法是CTAB法。原理:CTAB是一種陽離子去污劑,具有從低離子強度溶液中沉淀核酸與酸性多聚糖的特性。在高離子強度的溶液中(0.7mol/LNaCl),CTAB與蛋白質和多聚糖形成復合物,只是不能沉淀核酸。通過有機溶劑抽提,去除蛋白,多糖,酚類等雜質后加入乙醇沉淀即可使核酸分離出來。步驟如下:1)取材料,加液氮研磨成粉末狀,迅速移入1.5mlEppendorf管中;(2)加入800μl的CTAB提取緩沖液,混勻(CTAB在65℃水浴預熱),每5min輕輕震蕩幾次,20min后
簡述植物檢測試劑盒原理和使用方法2023/05/16
植物檢測試劑盒原理、使用方法:植物檢測試劑盒使試樣中各組分電離生成不同荷質比的離子,經加速電場的效果,形成離子束,進入質量剖析器,利用電場和磁場使發作相反的速度色散——離子束中速度較慢的離子通過電場后偏轉大,速度快的偏轉小;在磁場中離子發作角速度矢量相反的偏轉,即速度慢的離子仍然偏轉大,速度快的偏轉小;當兩個場的偏轉效果互相補償時,它們的軌跡便相交于一點。與此同時,在磁場中還能發作質量的別離,這樣就使具有同一質荷比而速度不同的離子聚集在同一點上,不同質荷比的離子聚集在不同的點上,將它們分別聚集而
印跡法(blotting)基本原理和應用方法2023/05/16
印跡法(blotting)即轉移電泳,是20世紀70年代發展起來的一種新方法。Southern于1975年建立了檢測特異DNA片段的DNA-RNA雜交法,稱作Southern印跡法。1977年Alwine等把此方法應用到RNA的研究方面,稱作Nouthern印跡法。1979年Towbin等則把該方法擴展應用到蛋白質分析方面,稱作Western印跡法。1982年Reinhart報道的雙向蛋白質印跡法,稱作Eastern印跡法。目前,有人把Southern,Nouthern,Western印跡法分別
蛋白質樣品中蛋白類雜質的檢測方法介紹2023/05/16
隨著蛋白類生物制品的發展,蛋白質純度已經成為藥品管理的重大問題。在生物制品的質量指導原則中指出:除了評價原料藥和藥物產品的純度,可能由預期產品和多種產品相關物質組成之外,還應評價可能出現的雜質成份。這些雜質可能是在生產過程中產生的或者是與產品相關,它們的結構可能是已知的、定性的,亦或是未知的。在評價樣品純度之前,首先要鑒定待測雜質的類型,如核酸、碳水化合物、脂質、無關蛋白質、同工酶類、失活蛋白質,進而確定在待測溶液中,能夠區分假定雜質和目標蛋白質的理化性質(化學分析或物理特征)。純化過程中可能已
【解決方案】BCA法測蛋白濃度樣品不溶解怎么辦2023/05/15
BCA法測蛋白濃度時,樣品不溶解時按照以下方法解決操作。BCA蛋白定量法是一種快速靈敏、穩定可靠的蛋白定量測定方法,其測定范圍是10-2000ug/ml,是比Lowry法更*的專用于檢測總蛋白質含量的產品。BCA蛋白定量測定方法:(96孔板)1、配制BCA工作液:根據標準品和樣品數量,按50體積試劑A,1體積試劑B配制適量BCA工作液,充分混勻。2、將蛋白標準品按0,1,2,4,6,8,10微升加到96孔板的蛋白標準品孔中,加滅菌雙蒸水補足到10微升;取10微升待測樣品加入96孔板。每個測定要做
標定標準溶液時平行測定的誤差范圍2023/05/15
滴定誤差要求:以不確定度表示,≤±0.2%。滴定誤差分類:主要包括稱量誤差、量器誤差、方法誤差。(1)稱量誤差每次稱量誤差:±0.0001g,一份試樣稱量誤差±0.0002g。若相對誤差±0.1%,則每一份試樣的稱量至少為0.2g。(2)量器誤差滴定管讀數誤差:±0.01ml,一份試樣量取誤差±0.02ml。若相對誤差±0.1%,則每一份試樣體積量至少為±20ml(3)方法誤差:主要是終點誤差。其原因有:指示劑不能準確地在化學計量點時改變顏色;標準溶液的加入不可能恰好在指示劑變色時結束;接近終點
標準溶液與基準物質有何關聯?2023/05/15
先來認識下標準溶液與基準物質標準溶液:已知準確濃度的溶液,在各種滴定分析方法中都要用到標準溶液,可根據溶質的性質、特點,按不同方法配置,配制方法有直接配置法和間接配置法。基準物質:能用來配制標準溶液或測定標準溶液濃度的物質。應具備如下條件:1、組成恒定并與化學式相符,若含結晶水,其結晶水的實際含量也應與化學式嚴格相符。2、純度足夠高(達99.9%以上),雜質含量應低于分析方法允許的誤差限。3、性質穩定,不易吸收空氣中的水分和二氧化碳,不分解,不易被空氣氧化。4、有較大的摩爾質量,以減少稱量時的相
簡述標準物質的級別分類與作用2023/05/15
我國將標準物質分為一級與二級,它們都符合“有證標準物質”的定義。(1)一級標準物質一級標準物質是用絕對測量法或兩種以上不同原理的準確可靠的方法定值,若只有一種定值方法可采取多個實驗室合作定值。它的不確定度具有國內最gao水平,均勻性良好,在不確定度范圍之內,并且穩定性在一年以上,具有符合標準物質技術規范要求的包裝形式。一級標準物質由國務院計量行政部門批準、頒布并授權生產,它的代號是以國jiaji標準物質的漢語拼音中“Guo”“Biao”“Wu”三個字的字頭“GBW”表示。(2)二級標準物質二級標
試驗中滴定的操作方法與注意事項2023/05/12
滴定的操作方法進行滴定時,應將滴定管垂直地夾在滴定管架上。如使用的是酸管,左手無名指和小手指向手心彎曲,輕輕地貼著出口管,用其余三指控制活塞的轉動。但應注意不要向外拉活塞以免推出活塞造成漏水;也不要過分往里扣,以免造成活塞轉動困難,不能操作自如。如使用的是堿管,左手無名指及小手指夾住出口管,拇指與食指在玻璃珠所在部位往一旁(左右均可)捏乳膠管,使溶液從玻璃珠旁空隙處流出。注意:①不要用力捏玻璃珠,也不能使玻璃珠上下移動;②不要捏到玻璃珠下部的乳膠管;③停止滴定時,應先松開拇指和食指,最后再松開無
影響酸堿中和滴定結果的因素說明2023/05/12
影響酸堿中和滴定結果的因素:1、讀數:滴定前俯視或滴定后仰視(偏大)滴定前仰視或滴定后俯視(偏小)2、未用標準液潤洗滴定管(偏大);未用待測溶液潤洗滴定管(偏小)3、用待測液潤洗錐形瓶(偏大)4、滴定前標準液滴定管尖嘴有氣泡,滴定后尖嘴氣泡消失(偏大)5、不小心將標準液滴在錐形瓶的外面(偏大)6、指示劑(可當作弱酸)用量過多(偏大),當弱酸,說明是酚酞做指示劑,堿滴定酸,相當于消耗更多的堿,所以結果偏大。指示劑(可當作弱堿)用量過多(偏大),當弱堿,說明是甲基橙做指示劑,酸滴定堿,相當于消耗更多
影響酸堿指示劑的原因分析2023/05/12
在實際中,影響酸堿指示劑變色范圍的因素主要有兩方面:一種是影響指示劑常數KHln的因素,包括溫度、溶劑、溶液的離子強度等,其中溫度的影響較大。另一種是影響變色范圍寬度的因素,如指示劑用量、滴定程序等,現具體討論如下。1.溫度溫度改變時,指示劑常數KHln及水的離子積KW均有改變,因此指示劑的變色范圍也隨之發生改變。例如,18℃時,甲基橙的變色范圍為3.1~4.4,而100℃時,變為2.5~3.7。因此,滴定宜在室溫下進行。如必須加熱,應該將溶液冷卻后再進行滴定。2.溶劑指示劑在不同溶劑中其pKH
酸堿指示劑的自制方法分享2023/05/12
有許多植物色素在不同pH值的溶液里會呈現出不同的顏色。因此,每個地方都可以就地取材,自制一些酸堿指示劑。下面遠慕生物介紹一些自制的方法:1.從紅蘿卜皮中提取酸堿指示劑:刮下紅蘿卜的紅皮后,用95%的酒精浸泡一天左右,過濾取出它的濾液即酸堿指示劑。按檢驗的需要制作pH1~14的標準液若干個,每個標準液取10ml分置于試管中,再分別加入紅蘿卜皮浸泡液10滴,塞緊作為比色樣品。在某待測溶液中加入紅蘿卜浸泡液,顏色發生變化后再與比色樣品比較,就能確定待測溶液pH值的大致范圍。2.從紫草中提取酸堿指示劑:
不同動物細胞融合的特點和誘導因素2023/05/11
不同動物細胞融合的特點和誘導因素1、病毒誘導融合病毒是最早采用的融合劑。常用于誘導動物細胞融合的病毒有仙臺病毒、新城雞瘟病毒、皰疹病毒等,其中仙臺病毒最常chang用。用作融合劑的病毒必須事先用紫外線或β-丙內酯滅活,使病毒的感染活性喪失而保留病毒的融合活性。優點:融合率較高,對各種動物細胞都適宜,且仙臺病毒能在雞胚中大量繁殖,容易培養;缺點:仙臺病毒不穩定,在保存過程中融合活性會降低,并且制備過程比較煩瑣。此外,病毒引進細胞后,可能會對細胞的生命活動產生干擾。2、聚乙二醇(PEG)誘導融合聚乙
昆蟲細胞培養的發展和關鍵點介紹2023/05/11
隨著生命科學的迅速發展,細胞工程愈來愈受到人們的重視。以昆蟲細胞為對象的細胞培養技術在現代實驗生物學上具有重要的價值,已經廣泛地應用于醫學、農業及生物學的各個領域。昆蟲細胞是農業生物應用方面的高新技術,主要是提取來自昆蟲的一類真核細胞。通過培養制造宿主的病毒,這些病毒可以引起昆蟲流行病,但對人畜和植物無害,因而可作病毒殺蟲劑。還可以生產某些藥用蛋白。許多昆蟲培養基配方正不斷得到改進,以使之適于細胞生長。zui通用的商品培養基有Grace氏培養基、TC-100、IPL-41、TNM-FH以及經改良
遠慕解析:細胞轉染實驗中常見問題2023/05/11
細胞轉染常見問題一、轉染效率低影響轉染效率因素很多,主要因素有細胞培養物、血清、載體構建、DNA質量以及轉染技術等。1.沒有使用優化條件:優化陽離子脂質體試劑和DNA的量。2.DNA-陽離子脂質體試劑復合物在存在血清條件下形成。3.存在抑制劑:不要在用于制備DNA-陽離子脂質體復合物的培養基中使用抗生素,EDTA,檸檬酸鹽,磷酸鹽,RPMI,硫酸軟骨素。透明質酸,硫酸葡聚糖或其他硫酸蛋白多糖。4.不恰當的細胞密度:轉染時融合度應為70%-90%。5.陽離子脂質體試劑凍結:不要使用凍結的或儲存溫度
原代細胞不貼壁的原因與解決辦法2023/05/11
大多數原代貼壁細胞貼壁時間是6h到12h,細胞不貼壁有好多種原因的:1、如果你用玻璃培養瓶培養的話,有可能你的瓶子沒處理好;建議你用一次性培養瓶,進口的都可以。2、一般做原代細胞貼壁培養用胰酶消化,消化的程度要掌握好,如果消化時間不到、分散不均勻不貼壁。一般消化有熱消化,就是放在37度里消化,時間比較短不好控制,傳代培養常用。還有就是冷消化放在4度里,一般在幾個小時以上,胰酶濃度也有要求的,一般都用0.125-0.25%之間。ph在7.6左右。3、還有就是天然培養基的選擇,就是血清種類,血清能夠
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