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在PCR反應(yīng)體系中添加劑DMSO的作用2023/12/27: DMSO主要用于高GC含量的模板擴(kuò)增，可能的機(jī)理是改善GC含量高的DNA的變形情況，降低其二級(jí)結(jié)構(gòu)，使得聚合酶在二級(jí)結(jié)構(gòu)處延伸。DMSO可以提高PCR的特異性,幫助擴(kuò)增一些難擴(kuò)的模板。當(dāng)體系中加入DMSO時(shí)，可適當(dāng)降低退火溫度。在實(shí)踐中，聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)可能因各種原因而失敗，通常表現(xiàn)為兩個(gè)問題，一是目的模板的擴(kuò)增量太少，二是非目的基因擴(kuò)增太多。這種情況研究人員通常會(huì)在反應(yīng)體系中加入合適的添加劑進(jìn)行解決。通常添加劑的作用主要是降低基因的二級(jí)結(jié)構(gòu)或者降低非特異性的啟動(dòng)。下面是幾種常用的添加劑以及它們的

PCR技術(shù)的常規(guī)實(shí)驗(yàn)流程步驟2023/12/19: PCR（聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)）是一種分子生物學(xué)技術(shù)，現(xiàn)在已經(jīng)被廣泛運(yùn)用于臨床和實(shí)驗(yàn)室，用于擴(kuò)增特定的DNA片段。它的基本原理就是在體外模擬細(xì)胞內(nèi)DNA復(fù)制的條件，最終完成特定基因的體外復(fù)制。PCR實(shí)驗(yàn)基本由變性、退火、延伸三個(gè)步驟完成。1.變性。變性的目的是使模板DNA雙鏈解旋成為單鏈以便與引物結(jié)合，通常給它加溫至95℃（這是Taq酶進(jìn)行30個(gè)左右的循環(huán)后活力不致受到過多損失時(shí)能耐受的最高溫度）。模板的變性對(duì)PCR成功與否至關(guān)重要，第一輪循環(huán)中變性時(shí)間往往為10min，然而根據(jù)經(jīng)驗(yàn)，在其他各次的循環(huán)中

胎牛血清的功能有哪些?2023/12/12: 胎牛血清是細(xì)胞培養(yǎng)中用量最大的天然培養(yǎng)基，含有豐富的細(xì)胞生長(zhǎng)必須的營(yíng)養(yǎng)成份，常用于動(dòng)物細(xì)胞的體外培養(yǎng)，具有極為重要的功能。1.提供對(duì)維持細(xì)胞指數(shù)生長(zhǎng)的激素，基礎(chǔ)培養(yǎng)基中沒有或量很少的營(yíng)養(yǎng)物，以及主要的低分子營(yíng)養(yǎng)物。2.提供結(jié)合蛋白，能識(shí)別維生素、脂類、金屬和其他激素等，能結(jié)合或調(diào)變它們所結(jié)合的物質(zhì)活力。3.有些情況下結(jié)合蛋白質(zhì)能與有毒金屬和熱原質(zhì)結(jié)合，起到解毒作用。4.是細(xì)胞貼壁、鋪展在塑料培養(yǎng)基質(zhì)上所需因子來源。5.起酸堿度緩沖液作用。6.提供蛋白酶抑制劑，使在細(xì)胞傳代時(shí)使剩余胰蛋白酶失活，保

細(xì)胞爬片（玻片）的用前準(zhǔn)備2023/12/06: 細(xì)胞爬片又名玻片，是指讓玻片浸在細(xì)胞培養(yǎng)基內(nèi)，細(xì)胞在玻片上生長(zhǎng)，主要用于組織學(xué)，冰凍切片，細(xì)胞涂片，原位雜交等。除了在實(shí)驗(yàn)中的使用，實(shí)驗(yàn)前的準(zhǔn)備也十分重要，讓我們一起來看看使用前需要做哪些準(zhǔn)備吧！用前準(zhǔn)備：1、蓋玻片的選擇爬片可用一般的蓋玻片，也可用專用細(xì)胞爬片，價(jià)格比較昂貴但是細(xì)胞貼壁牢固，拍出照片效果好；2、爬片的剪裁可根據(jù)自己的需要，到染色時(shí)再將之切開，這樣既保證了細(xì)胞均一性，又可同時(shí)做幾個(gè)指標(biāo)的染色剪裁成合適大小，置于6孔板、12孔板或24孔板；3、爬片的使用前處理將剪裁好的爬片，置于濃

如何鋪出均勻的細(xì)胞培養(yǎng)板？2023/11/20: 細(xì)胞居中和細(xì)胞邊緣化從經(jīng)濟(jì)和高效的角度來說，需要根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康倪x擇不同規(guī)格的培養(yǎng)板。如在進(jìn)行藥物對(duì)待測(cè)細(xì)胞半抑制率（IC50）測(cè)試時(shí)，通常使用96孔板，一方面可以設(shè)置濃度梯度；另外還可一次性測(cè)多個(gè)藥物，減少實(shí)驗(yàn)誤差。收集細(xì)胞要混勻消化后的細(xì)胞一定要充分混勻，要把聚在一起的細(xì)胞團(tuán)充分地吹打開，最好是單個(gè)的狀態(tài)，但同時(shí)又不能損傷細(xì)胞，可以用玻璃吸管的移液器操作。離心也很有講究，一般用1000rpm/min即可。離心力太大細(xì)胞容易抱團(tuán)，然后懸浮離心后的細(xì)胞團(tuán)時(shí)，先不要把所有液體都加進(jìn)，一般先加2mL液體

PVDF膜的主要用途及功能2023/11/14: PVDF膜這種說法很籠統(tǒng)，因?yàn)镻VDF膜有很多種，這邊簡(jiǎn)單介紹幾種：1、水處理用PVDF膜，分為超濾膜和微濾膜兩種，主要用于污水、海水淡化等的前處理，清除大分子、細(xì)菌、泥沙等雜質(zhì)2、戶外建筑用PVDF膜，主要用戶戶外建筑的玻璃、外墻、戶外廣告牌等的保護(hù)，主要是耐老化和耐磨功能3、電池用PVDF膜，包括在燃料電池和鋰離子聚合物電池中的隔膜應(yīng)用PVDF的主要性能：?機(jī)械強(qiáng)度與堅(jiān)韌度高?防霉菌性?高耐磨性?對(duì)氣體和液體的高耐滲透性?耐熱穩(wěn)定性好?阻燃，低煙?溫度提升過程中抗蠕變性好?純度高?容易進(jìn)行熔

細(xì)胞培養(yǎng)皿的用途、注意事項(xiàng)有哪些？2023/11/09: 定義：培養(yǎng)皿是一種用于微生物或細(xì)胞培養(yǎng)的實(shí)驗(yàn)室器皿，由一個(gè)平面圓盤狀的底和一個(gè)蓋組成，一般用玻璃或塑料制成。培養(yǎng)皿材質(zhì)基本上分為兩類，主要為塑料和玻璃的，玻璃的可以用于植物材料、微生物培養(yǎng)和動(dòng)物細(xì)胞的貼壁培養(yǎng)也可能用到。塑料的可能是聚乙xi材料的，有一次性的和多次使用的，適合實(shí)驗(yàn)室接種、劃線、分離細(xì)菌的操作，可以用于植物材料的培養(yǎng)。用途：適用于防疫站、醫(yī)院、生物制品、食品工業(yè)、制藥工業(yè)等單位，用于細(xì)菌的分離培養(yǎng)、抗菌素效價(jià)檢驗(yàn)和定性檢驗(yàn)分析。在農(nóng)業(yè)、水產(chǎn)等科學(xué)研究用于對(duì)種子發(fā)牙、植物、昆蟲、魚種

新手如何培養(yǎng)細(xì)胞？2023/11/06: 細(xì)胞培養(yǎng)基本概念：細(xì)胞培養(yǎng)將活細(xì)胞（尤其是分散的細(xì)胞）在體外進(jìn)行培養(yǎng)的方法稱為細(xì)胞體外培養(yǎng)。狹義的主要是指分離（散）細(xì)胞培養(yǎng)，廣義的還包括單（個(gè)）細(xì)胞培養(yǎng)又稱克隆，是指單個(gè)細(xì)胞通過有絲分裂形成的細(xì)胞群體。原代細(xì)胞初次培養(yǎng)。即培養(yǎng)物一經(jīng)接種到培養(yǎng)皿中就不再分割，任其生長(zhǎng)繁殖而不更換生長(zhǎng)器皿。傳代培養(yǎng)隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)、細(xì)胞不斷分裂繁殖，細(xì)胞之間相互接觸會(huì)發(fā)生接觸性抑制，生長(zhǎng)速度逐漸減慢甚至停止。培養(yǎng)皿中營(yíng)養(yǎng)物逐漸不足，代謝產(chǎn)物不斷累積，不利于細(xì)胞繼續(xù)生長(zhǎng)。在這種情況下，需要將培養(yǎng)物分割成小的部分，

ELISA測(cè)定應(yīng)該如何正確操作2023/10/30: ELISA測(cè)定現(xiàn)在通常為采用手工操作的以微孔板條為固相的測(cè)定模式，測(cè)定操作非常簡(jiǎn)單，一般涉及到標(biāo)本的收集保存、試劑準(zhǔn)備、加樣、溫育、洗板、顯色、比色、結(jié)果判斷和結(jié)果報(bào)告及解釋等方面，其中任一步驟的不當(dāng)都會(huì)影響測(cè)定結(jié)果，且尤以加樣、溫育和洗板等步驟為甚。現(xiàn)分述如下。一、臨床標(biāo)本的收集和保存用于ELISA測(cè)定的臨床標(biāo)本最為常用的是血清（漿），有時(shí)因?yàn)樘囟ǖ臋z測(cè)目的，也用到唾液、腦脊液、尿液、糞便等標(biāo)本。目前臨床上使用血清標(biāo)本測(cè)定的標(biāo)志物一般有傳染性病原體的抗原和抗體、腫瘤標(biāo)志物、激素、特種蛋白、細(xì)胞

影響ELISA試劑盒試驗(yàn)成果的要素2023/10/26: ELISA試劑盒，即酶聯(lián)免疫法。ELISA法具有靈敏度高、特異性強(qiáng)、重復(fù)性好的特點(diǎn)，并具有操作簡(jiǎn)潔、無放射性危害的優(yōu)點(diǎn)，因此多年來廣泛應(yīng)用于各高校、醫(yī)院、血站和科研機(jī)構(gòu)的試驗(yàn)室中。影響ELISA試驗(yàn)的要素有如下三方面：一、試劑盒1、抗原、抗體活性對(duì)效價(jià)的影響：主要是試劑中抗體（或抗原）的效價(jià)下降或失活，成果不易判別。再有ELISA試劑盒靈敏度高，對(duì)雜質(zhì)的反響靈敏度也高，試驗(yàn)中空白對(duì)照OD值偏高或假陽性；2、酶結(jié)合物濃度過高，也會(huì)導(dǎo)致OD值假性增高。二、試驗(yàn)儀器1、加樣器是否通過校正，酶免測(cè)定血清

什么是牛血清白蛋白？2023/10/23: 牛血清白蛋白（BSA）是牛血清中的一種球蛋白，包含607個(gè)氨基酸殘基，分子量為66.446KDa，等電點(diǎn)為4.7。應(yīng)用：牛血清白蛋白（BSA）在生化實(shí)驗(yàn)中有廣泛的應(yīng)用，例如在WB實(shí)驗(yàn)中加入BSA，通過提高溶液中蛋白質(zhì)的濃度，對(duì)酶起保護(hù)作用。防止酶的分解和非特異性吸附，能減輕有些酶的變性減輕不利環(huán)境因素，如加熱、表面張力及化學(xué)因素引起的變性。測(cè)定蛋白濃度按50：1配置BCA工作液。10ulC液（蛋白標(biāo)準(zhǔn)）+90ulPBS液稀釋成0.5mg/ml的蛋白標(biāo)準(zhǔn)液。再分別以0、1、2、4、8、12、16、

離心管的作用及注意事項(xiàng)，有哪些？2023/10/19: 一、種類：大量離心管（500mL、250mL）普通離心管（50mL、15mL）微量離心管（2mL、1.5mL、0.65mL、0.2mL）離心管按照底部形狀：錐形離心管，底部為錐形，是使用最多的離心管類型，平底離心管、圓底離心管離心管按照蓋子閉合方式：壓蓋離心管，以按壓方式密封的離心管，常見于微型離心管、螺旋蓋離心管，又可分為平蓋（蓋子頂部是平的）和塞蓋（蓋子頂部有塞子形狀）離心管按材料分：1、玻璃離心管：使用玻璃管時(shí)離心力不宜過大，需要墊橡膠墊，防止管子破碎，高速離心機(jī)一般不選用玻璃管。離心管蓋

ELISA（酶聯(lián)免疫吸附）原理及步驟詳解2023/10/13: 1.原理：免疫分析是一種利用特定抗體與抗原或半抗原發(fā)生的高選擇性高特異性識(shí)別和結(jié)合原理，對(duì)待測(cè)抗體或者抗原進(jìn)行分析測(cè)定的方法，酶聯(lián)免疫吸附分析（下稱ELISA）是免疫分析的一種，分三個(gè)部分組成：免疫識(shí)別，信號(hào)輸出和數(shù)據(jù)處理。2.步驟：免疫識(shí)別是在聚苯乙烯制成的96孔板上包被抗體，而后利用抗體識(shí)別待測(cè)的抗原（通常是疾病的蛋白質(zhì)生物標(biāo)記物，病毒，細(xì)菌等等，從復(fù)雜待測(cè)液中將抗原吸附到96孔板表面。接著用帶有辣根過氧化酶（HorseradishPeroxidase,HRP）、熒光或放射性標(biāo)記的抗體通過直

PCR 成功的四大要素及注意事項(xiàng)2023/10/08: 一、模板1.模板降解1）盡量選擇新鮮提取的模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增，通過凝膠電泳檢測(cè)模板的完整性，若降解嚴(yán)重需要重新制備模板；2）模板避免反復(fù)凍融。2.模板中含有抑制DNA聚合酶活性的抑制劑1）采用離心柱法提取核酸，純化模板，消除抑制劑的干擾；2）適當(dāng)減少模板量，采用梯度稀釋摸索最佳模板量；3）選用抗逆性強(qiáng)的DNA聚合酶。3.模板量太低1）適當(dāng)增加模板量；2）模板為cDNA時(shí)，選用目的基因表達(dá)量高的組織提取高質(zhì)量RNA并選用基因克隆專用的反轉(zhuǎn)錄試劑盒得到的cDNA作為模板；3）選用靈敏度高的DNA聚合

如何正確的使用封板膜？2023/09/27: 1.將封板膜貼在板子上從自封袋中取出單張封板膜，然后重新封好自封袋，以保持其中的無酶環(huán)境。保持底襯面朝上，握住封板膜，沿著切線處慢慢撕下底襯。隨后，將封板膜粘性面的一端貼在板子上，掌握好距離和角度，避免后續(xù)貼歪。貼的過程中一端貼，另一端拉住。注意：一定要戴手套●如果使用單端標(biāo)簽的封板膜，則將襯紙部分除去、然后將封板膜錨固到板上，使其密封在整個(gè)板上，然后繼續(xù)除去襯紙。這種方法可以消除封板膜產(chǎn)生的卷曲和回滾。●如果使用兩個(gè)末端標(biāo)簽的產(chǎn)品，請(qǐng)以連續(xù)平滑的方式剝離中心襯紙。緩慢剝離內(nèi)襯可以減少卷曲。注意

細(xì)胞篩網(wǎng)的使用方法2023/09/19: 細(xì)胞篩網(wǎng)（產(chǎn)品別名：細(xì)胞過濾網(wǎng)）常用于器官培養(yǎng)、組織轉(zhuǎn)運(yùn)或移植，尤其適用于干細(xì)胞和原代細(xì)胞過濾，常與流式細(xì)胞儀配套使用，是流式細(xì)胞分選實(shí)驗(yàn)。細(xì)胞過濾器使用堅(jiān)固的尼龍網(wǎng)制作，主要分為三個(gè)篩孔型號(hào)：100um，70um，40um，可滿足不同細(xì)胞大小的過濾操作。那么怎樣才是正確的細(xì)胞篩網(wǎng)使用方法？讓我們一起來看看！使用方法：1.準(zhǔn)備濾器：選擇一個(gè)合適的細(xì)胞篩網(wǎng)，并根據(jù)需要在濾器上加上濾紙，使其更容易使用。2.準(zhǔn)備細(xì)胞懸液或培養(yǎng)基：將細(xì)胞懸液或培養(yǎng)基倒入容器中，并加入需要的藥物、酶、抗生素等。3.過濾細(xì)

ELISA試劑盒操作的5個(gè)方面2023/09/13: ELISA試劑盒操作較繁雜,在操作中應(yīng)留神以下5個(gè)方面。1.跟著病況的進(jìn)展或由其他因素影響，某些抗體在機(jī)體內(nèi)的含量發(fā)作大幅動(dòng)搖，因此有必要對(duì)標(biāo)本進(jìn)行預(yù)處理。間接法測(cè)定中，標(biāo)本恰當(dāng)稀釋還可下降非特異性反響。2.加樣一般運(yùn)用加液器，在ELISA試劑盒中一般有4次加樣：加標(biāo)本、加酶結(jié)合物、加底物和加間斷液。加標(biāo)本時(shí)有必要每份標(biāo)本運(yùn)用一支移液器吸嘴，避免交叉污染。加酶結(jié)合物、底物和間斷液時(shí)則不需更換吸嘴。3.在成批手藝檢測(cè)中，還應(yīng)留神操作時(shí)差的影響。加樣及混勻時(shí)間的差異，使抗原抗體反響和酶促反響時(shí)間不一

胰蛋白胨國(guó)產(chǎn)與進(jìn)口的區(qū)別及特點(diǎn)？2023/09/11: 國(guó)產(chǎn)的的胰蛋白胨是以新鮮牛肉和牛骨經(jīng)胰酶消化，濃縮干燥而成的淺黃色粉末。具有色淺、易溶、透明、無沉淀等良好的物理性狀。含有豐富的氮源、氨基酸等，可配制各種微生物培養(yǎng)基，生化制品及微生物學(xué)科研等領(lǐng)域中。進(jìn)口的胰蛋白胨與國(guó)產(chǎn)的酪蛋白胨相同，也叫胰酪蛋白胨，都是采用酪蛋白為原料，經(jīng)過消化、脫色、過濾、濃縮、噴霧干燥而得到的一種淺黃色至類白色的干燥粉末。易溶于水，水溶液呈淡黃色。酪蛋白又稱干酪素是從牛奶中提取的一種營(yíng)養(yǎng)價(jià)值很高的磷蛋白，是生產(chǎn)蛋白胨常用的原料。用此原料生產(chǎn)的蛋白胨，其氨基酸比較齊全，特別

使用培養(yǎng)皿的注意事項(xiàng)2023/09/01: 培養(yǎng)皿是一種用于微生物或細(xì)胞培養(yǎng)的實(shí)驗(yàn)室器皿，由一個(gè)平面圓盤狀的底和一個(gè)蓋組成，是細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中常見的一種耗材。那么使用培養(yǎng)皿有哪些注意事項(xiàng)呢？一起來看看吧！注意事項(xiàng)1、培養(yǎng)皿質(zhì)地脆弱、易碎，故在清洗及拿放時(shí)應(yīng)小心謹(jǐn)慎、輕拿輕放。2、使用完畢的培養(yǎng)皿及時(shí)清洗干凈，存放在安全、固定的位置，防止損壞、摔壞。3、使用培養(yǎng)皿的時(shí)候倒置的原因：1）防止培養(yǎng)基的水分蒸發(fā)，特別是培養(yǎng)基倒的時(shí)候如果倒的比較少的時(shí)候更容易干掉,影響微生物生長(zhǎng)。2）防止形成的冷凝水滴落在培養(yǎng)基上造成染菌。3）倒放可以在某種程度上防止菌

超濾管的使用和注意事項(xiàng)2023/08/30: 超濾是大分子脫鹽、濃縮的方法，重復(fù)性好，得率有保障，已經(jīng)在蛋白、抗體、病毒、核酸、囊泡等樣品制備中建立標(biāo)準(zhǔn)操作；在目前大熱的外泌體制備中也已經(jīng)成為主流方法。超濾管該如何使用？注意事項(xiàng)有哪些？讓我們一起來看看吧！使用方法1、預(yù)處理：新超濾管：使用前用純水浸泡，冰箱預(yù)冷10min。然后將水倒出，置于冰上預(yù)冷2-5min，加樣。舊超濾管：倒出管內(nèi)的乙醇浸泡液，用純水沖洗干凈10遍（注意水流速盡量平緩，防止沖破濾膜），置于冰上預(yù)冷2-5min，加樣。2、加樣：如超濾管中有少許殘留水可將超濾管內(nèi)管倒置10

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