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上海昆盟生物科技有限公司
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原代心肌細胞研究要注意些什么？2021/11/24
作為主要的研究模型，原代心肌細胞被廣泛應用于心血管研究。那么我們在研究過程中都要注意些什么呢？1、新生鼠年齡的選擇新生鼠心肌細胞在出生后3天內具有部分增殖能力，而成年鼠心肌細胞為終末分化細胞，不再具有分裂增殖能力。因此，大鼠出生時間越短，離體心肌細胞存活率越高，越容易貼壁。大量觀察表明，選擇1～3日齡大鼠分離心肌細胞進行原代培養是理想的，尤其是半日齡大鼠。2、消化酶的選擇和使用新生大鼠原代心肌細胞間可采用組織塊法和消化法分離。前者較少使用，因為難以獲得密度均勻的細胞和控制成纖維細胞的生長。消化法
一文帶你全面了解細胞因子2021/10/21
一文帶你全面了解細胞因子一、細胞因子的概念細胞因子（cytokine，CK），是由免疫細胞（如單核、巨噬細胞、T細胞、B細胞、NK細胞等）和某些非免疫細胞（內皮細胞、表皮細胞、纖維母細胞等）經刺激而合成、分泌的一類具有廣泛生物學活性的小分子蛋白質（多肽或糖蛋白）。細胞因子的發現歷史1957年，發現干擾素（interferon，IFN）1969年，提出淋巴因子（lymphokine）的概念1974年，定名細胞因子（cytokine，CK）1975年，命名了腫瘤壞死因子（TumorNecrosisF
RNA pull down實驗技術2021/09/23
RNApulldown實驗技術1.實驗原理RNApulldown是體外研究RNA與蛋白互作的重要技術。該技術是用生物素標記體外轉錄的靶RNA分子，再用鏈霉親和素純化出與靶RNA結合的蛋白復合體，洗脫得到RNA結合蛋白質。再通過westernblot實驗檢測特定的RNA結合蛋白是否與靶RNA結合；或通過質譜儀檢測可以篩選出與靶RNA結合的蛋白。生物素與鏈霉親和素間的作用是目前已知強度最高的非共價作用；其中活化生物素可以在蛋白質交聯劑的介導下，與已知的幾乎所有生物大分子偶聯。因此用生物素標記核酸后，
DNA pull down實驗技術2021/09/23
DNApulldown實驗技術1.實驗原理DNApulldown是體外研究DNA與蛋白互作的有力工具。該技術將生物素標記的DNA片段結合在鏈霉親和素磁珠上，再與細胞核蛋白孵育，純化出與DNA片段互作的蛋白，洗滌洗脫得到的蛋白產物，做Westernblot檢測特定蛋白是否與靶DNA片段結合；做質譜鑒定即可篩選出與DNA片段可能互作的蛋白信息(如：轉錄因子、組蛋白等)。生物素與鏈霉親和素間的作用是目前已知強度最高的非共價作用；其中活化生物素可以在蛋白質交聯劑的介導下，與已知的幾乎所有生物大分子偶聯。
GST pull down實驗技術2021/09/23
GSTPulldown實驗技術1.實驗原理Pulldown技術是將"誘餌"蛋白與一種易于純化的配體標簽（如：GST標簽、His標簽）進行融合表達，而帶標簽的誘餌蛋白能被特異結合該標簽的固相親和配基捕獲，形成"次級親和支持物"，用于純化與誘餌蛋白相互作用的其他蛋白。純化產物洗脫后，經Westernblot驗證或LC-MS/MS，即鑒定與誘餌蛋白互作的蛋白。1988年Smith等利用谷胱甘肽-S-轉移酶（GST）融合標簽從細菌中一步純化出GST融合蛋白。從此，GST融合蛋白在蛋白質相互作用研究領域里
常用的細胞凋亡檢測方法【大盤點】2021/09/22
細胞凋亡人體內的細胞注定是要死亡的，有些死亡是生理性的，有些死亡則是病理性的，有關細胞死亡過程的研究，已成為生物學、醫學研究的一個熱點。已知的細胞死亡方式起碼有兩種，即細胞壞死與細胞凋亡(apoptosis)。細胞壞死是早已被認識到的一種細胞死亡方式，而細胞凋亡則是逐漸被認識的一種細胞死亡方式。此圖片來源于網絡細胞凋亡是細胞的一種基本生物學現象，在多細胞生物去除不需要的或異常的細胞中起著必要的作用。它在生物體的進化、內環境的穩定以及多個系統的發育中起著重要的作用。細胞凋亡不僅是一種特殊的細胞死亡
細胞低氧培養模型簡介2021/09/17
人的生存離不開氧氣。如果你感覺很長一段時間里整天無精打采、昏昏欲睡，在排除睡眠不足的因素外，那么你有可能是血液中缺氧了。血液除了能在身體內流動，攜帶能量、廢物等，最主要的功能就是攜帶氧氣，這是它的基本功能之一。如果血液缺氧，嚴重時就會導致器官病變，最常見的就是心梗、腦梗等。近年來，低氧(Hypoxic)于生物機體及細胞的生理作用及其分子機制研究越來越受到醫學科研學者的關注。低氧培養的適用研究領域近30年來與“低氧誘導”相關的文章統計(此項數據來源于Pubmed數據庫)細胞是生物體結構和功能的基本
【表觀遺傳】中樞性性早熟研究2021/09/17
中樞性性早熟（CPP）是兒科內分泌的常見疾病，發病率較高，且逐年增加趨勢明顯。CPP可以導致患者或者家長出現社會、心理問題，而且還可能嚴重損害兒童的終身高。因此，CPP是兒科內分泌醫生密切關注的疾病之一。CPP發病原因目前尚不明確，可能是由于某種因素促發了下丘腦促性腺激素釋放激素（GnRH）神經元，使其提前活化，通過分泌大量的GnRH，進而激活下丘腦-垂體-性腺軸。5-羥色胺（5-HT）最初在血清中發現，又名血清素，是一種吲哚衍生物，它廣泛存在于哺乳動物中。5-HT由色氨酸代謝產生。血液中色氨酸
細胞生物學實驗2021/09/17
細胞生物學實驗及其定制化解決方案常用的細胞生物學相關實驗，主要包含：細胞培養、細胞保種、原代細胞分離和培養、細胞增殖檢測（MTT法/CCK8法）、細胞凋亡、細胞周期、細胞遷移、細胞侵襲、流式細胞分選、慢病毒包裝及穩轉株篩選、電生理檢測、定制化細胞模型等。原代細胞分離我司可提供細胞培養和原代細胞分離的服務。例如：原代schwann細胞、原代海馬神經元細胞、原代成骨細胞、臍帶間充質干細胞、海綿體平滑肌細胞等。細胞培養與傳代細胞凍存/保種細胞復蘇細胞換液培養細胞傳代培養細胞共培養細胞3D培養類器官培養
細胞焦亡研究中的檢測指標有哪些？2021/09/16
細胞焦亡是什么？細胞凋亡（Apoptosis）是經典的細胞死亡方式，但隨著研究的不斷深入，很多細胞死亡現象并不能用細胞凋亡來解釋，隨著研究的深入，科學家又陸續發現了一些新的細胞死亡新機制。細胞焦亡（Pyroptosis）便是近年來發現并證實的一種炎癥程序性細胞死亡，其特征為依賴于炎性半胱天冬酶（主要是caspase-1，4，5，11），并伴有大量促炎癥因子的釋放。細胞焦亡可由各種病理刺激引發，如中風、心臟病發作、癌癥、感染等。按照激活機制，細胞焦亡可分為Caspase-1依賴和不依賴兩種途徑。兩
如何選擇合適的內參抗體？2021/09/16
如何選擇合適的內參抗體？Tips：在選擇內參抗體時，我們需要遵循幾個原則：1.種屬來源哺乳動物的樣本需要選擇哺乳動物中穩定表達的蛋白作為內參，同樣的，植物樣本需要選擇植物中穩定表達的蛋白作為內參。2.細胞定位靶標蛋白的細胞定位不同，適合的內參也不同。如全細胞裂解液可選擇beta-actin、beta-tubulin等，膜蛋白一般選擇NaKATPase，核蛋白則選擇LaminB1、HistoneH3等。3.分子量內參蛋白的分子量需要與目標蛋白的分子量有所區別，否則兩者條帶無法分開。一般目的蛋白與內
TUNEL法細胞凋亡檢測假陽性率高怎么破？2021/09/15
TUNEL法基于對細胞DNA損傷的檢測，通?？捎糜跈z測組織切片樣本和細胞樣本，是晚期細胞凋亡檢測中常用的方法。那么對于檢測過程中常見的假陽性率高的現象是如何產生的呢？1.固定操作不當固定液選擇不恰當，固定液濃度過高，固定時間過長，組織切片過厚都會影響固定效果。一般建議選擇含4%多聚甲醛的PBS溶液來固定細胞或組織切片，時間在30min左右。2.基因轉錄水平高基因轉錄活性高的非凋亡細胞會產生假陽性，例如睪丸組織。3.激發光下長時間照射在強激發光長時間照射下，高濃度的PI會吸收能量在特定波長的激光光
原代細胞分離與培養2021/09/02
原代細胞(primarycell)是指從生物體獲取細胞直接培養。通常，把培養的第1代細胞與傳10代以內的細胞統稱為原代細胞培養。由于細胞剛從活體組織分離出來，因此原代細胞更接近于生物體內的生活狀態，且生物性狀尚未發生很大改變。這一方法可為研究生物體細胞的生長、代謝、繁殖提供有力的手段，同時也為以后傳代培養創造條件。原代細胞的分離與培養常用的原代細胞培養方法有組織塊培養和分散組織培養。組織塊培養：是將剪碎的組織塊直接移植在培養瓶壁上，加入培養基后進行培養。組織塊培養法是常用的、簡便易行和成功率較高
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