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PCR基因擴增儀現象是細胞發育到特定階段的需要,是細胞在給定時間內大量擴增基因序列、產生大量轉錄產物的一種有效手段。在卵母細胞的成熟過程中,擴增出大量的基因序列,用于基因轉錄,貯備大量的RNA轉錄本供受精后的早期使用,對于受精卵早期的蛋白質合成及其生命活動的正常執行以及隨后的細胞分化和胚胎發育均具有極其重要的生物學意義。但擴增出的大量基因序列僅在當代作為膜板進行轉錄用,不傳遞到下一代細胞。
PCR基因擴增儀技術(PCR)聚合酶鏈反應又稱無細胞分子克隆系統或特異性DNA序列體外引物定向酶促擴增法,是基因擴增技術的一次重大革新。可將極微量的靶DNA特異地擴增上百萬倍,從而大大提高對DNA分子的分析和檢測能力,能檢測單分子DNA或對每10萬個細胞中僅含1個靶DNA分子的樣品,因而此方法立即在分子生物學、微生物學、醫學及遺傳學等多領域廣泛應用和迅速發展。由于PCR具有敏感性高、特異性強、快速、簡便等優點,已在病原微生物學領域中顯示出巨大的應用價值和廣闊的發展前景。
實驗室工作導則
臨床PCR基因擴增儀檢驗實驗室的設計
(一)臨床基因擴增檢驗實驗室區域設計原則。原則上臨床基因擴增檢驗實驗室應當設臵以下區域:試劑儲存和準備區、標本制備區、擴增區、擴增產物分析區。這4個區域在物理空間上必須是*相互獨立的,各區域無論是在空間上還是在使用中,應當始終處于*的分隔狀態,不能有空氣的直接相通。根據使用儀器的功能,區域可適當合并。例如使用實時熒光PCR儀,擴增區、擴增產物分析區可合并;采用樣本處理、核酸提取及擴增檢測為一體的自動化分析儀,則標本制備區、擴增區、擴增產物分析區可合并。各區的功能是:
1.試劑儲存和準備區:貯存試劑的制備、試劑的分裝和擴增反應混合液的準備,以及離心管、吸頭等消耗品的貯存和準備。
2.標本制備區:核酸(RNA、DNA)提取、貯存及其加入至擴增反應管。對于涉及臨床樣本的操作,應符合生物安全二級實驗室防護設備、個人防護和操作規范的要求。
3.擴增區:cDNA合成、DNA擴增及檢測。
4.擴增產物分析區:擴增片段的進一步分析測定,如雜交、酶切電泳、變性液相分析、測序等。
(二)臨床PCR基因擴增儀檢驗實驗室的空氣流向。臨床基因擴增檢驗實驗室的空氣流向可按照試劑儲存和準備區→標本制備區→擴增區→擴增產物分析區進行,防止擴增產物順空氣氣流進入擴增前的區域。可按照從試劑儲存和準備區→標本制備區→擴增區→擴增產物分析區方向空氣壓力遞減的方式進行。可通過安裝排風扇、負壓排風裝臵或其他可行的方式實現。
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