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簡述實時熒光定量pcr儀的系統組成
2020年06月08日 15:21:10
來源：化工儀器網 點擊量：7456
近期，隨著疫情的發展，人們對醫療相關的科學儀器也認識不少。其中，實時熒光定量PCR儀這個名字經常出現在人們的眼前。那么，這個儀器究竟是什么呢？用來干嘛的呢？今天，小編就為大家簡單介紹一下這個設備。
【化工儀器網 技術指導】近期，隨著疫情的發展，人們對醫療相關的科學儀器也認識不少。其中，實時熒光定量PCR儀這個名字經常出現在人們的眼前。那么，這個儀器究竟是什么呢？用來干嘛的呢？今天，小編就為大家簡單介紹一下這個設備。
實時熒光定量pcr儀，由熒光定量系統和計算機組成，用來監測循環過程的熒光。與實時設備相連的計算機收集熒光數據。數據通過開發的實時分析軟件以圖表的形式顯示。原始數據被繪制成熒光強度相對于循環數的圖表。原始數據收集后可以開始分析。實時設備的軟件能使收集到的數據進行正常化處理來彌補背景熒光的差異。正常化后可以設定域值水平，這就是分析熒光數據的水平。
優勢
樣品到達域值水平所經歷的循環數稱為Ct值(限制點的循環數)。域值應設定在使指數期的擴增效率為大，這樣可以獲得準確，可重復性的數據。如果同時擴增的還有標有相應濃度的標準品，線性回歸分析將產生一條標準曲線，可以用來計算未知樣品的濃度。
系統組成
實時熒光定量PCR儀主要由兩部分組成，一個是PCR系統，一個是熒光檢測系統。由于定量PCR必需借助樣本和標準品之間的對比來實現定量的，對于定量PCR系統來說，重要的參數除了傳統PCR的溫控精確性、升降溫速度等等，更重要的還在于樣品孔之間的均一性，以避免微小的差別被指數級放大。
至于熒光檢測系統，多色多通道檢測是當今的主流趨勢，儀器的激發通道越多，儀器適用的熒光素種類越多，儀器適用范圍就越寬；多通道指可同時檢測一個樣品中的多種熒光，儀器就可以同時檢測單管內多模版或者內標+樣品，通道越多，儀器適用范圍越寬、性能就更強大。
熒光檢測系統主要包括激發光源和檢測器。激發光源有鹵鎢燈光源、氬離子激光器、發光二極管LED光源，前者可配多色濾光鏡實現不同激發波長，而單色發光二極管LED價格低、能耗少、壽命長，不過因為是單色，需要不同的LED才能更好地實現不同激發波長。監測系統有超低溫CCD成像系統和PMT光電倍增管，前者可以一次對多點成像，后者靈敏度高但一次只能掃描一個樣品，需要通過逐個掃描實現多樣品檢測，對于大量樣品來說需要較長的時間。定量PCR儀需要考慮的另外一個因素是軟件設計，這一點目前較新型號的儀器都有不錯的配套軟件可以滿足常規使用。
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