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我國科學家開發出適用于痕量樣本的m6A絕對定量新技術
2025年08月14日 08:34:20
來源：化工儀器網 作者：宋池 點擊量：604
我國科研團隊攻克了m6A絕對定量檢測的技術瓶頸，成功開發了新一代GLORI技術（GLORI 2.0和3.0），為研究稀有細胞和臨床微量樣本的表觀轉錄調控提供了強大工具。
近期，北京大學伊成器團隊與中國科學院遺傳與發育生物學研究所王秀杰團隊合作，在表觀轉錄組學研究領域取得重要技術突破。相關研究成果發表于國際知名學術期刊《自然·方法》(Nature Methods)，論文標題為“Mild and ultrafast GLORI enables absolute quantification of m6A methylome from low-input samples”(溫和超快的GLORI實現低輸入樣本中m6A甲基化組的絕對定量)。
N6-甲基腺嘌呤(m6A)是真核生物信使RNA(mRNA)中最普遍的核心化學修飾之一，在基因表達調控中扮演著關鍵角色，影響RNA的可變剪接、轉運及穩定性。研究團隊此前建立了基于特異性脫氨反應的化學測序技術GLORI，用于m6A的絕對定量檢測。然而，該技術存在反應時間長、易導致RNA降解、對起始樣本需求量較大等局限，限制了其在珍貴低輸入樣本(如少量細胞、臨床活檢樣本等)中的廣泛應用。
針對這些技術瓶頸，研究團隊深入剖析了GLORI介導的脫氨機制，并在此基礎上優化反應條件，成功開發了新一代m6A檢測方法——GLORI 2.0。該方法采用溫和、快速且操作便捷的“一鍋式”反應流程，顯著提升了反應過程中RNA樣品的完整性，并大幅降低了對RNA起始量的需求，所需樣本量降至約一萬個細胞水平。實驗驗證表明，與原始GLORI方法相比，GLORI 2.0能夠有效識別更多位于低豐度mRNA上的m6A修飾位點。
為進一步提升技術的靈敏度以適應更低樣本量的需求，研究團隊創新性地設計了一種“反轉錄沉默載體RNA”(RT-silencing carrier RNA)。該載體在后續的文庫構建過程中能夠被自動移除，從而避免對測序結果產生干擾。將這一策略整合進GLORI 2.0體系后，研究人員進一步開發出GLORI 3.0技術。GLORI 3.0成功將所需樣本量進一步降至500-1000個細胞水平，實現了在超低起始量條件下精準繪制全轉錄組m6A修飾圖譜，同時保持了良好的定量性能。
為評估GLORI 3.0技術的實際應用潛力，研究團隊將其應用于分析從小鼠海馬體分離的微量突觸和細胞質組分的m6A修飾情況。分析結果顯示，如Slitrk3、Bdnf等與突觸功能相關的基因上存在較高的m6A修飾水平，驗證了該技術在處理痕量生物樣本方面的可行性和可靠性。
經過系統優化的GLORI技術系列，特別是GLORI 3.0，顯著提升了m6A修飾絕對定量檢測的靈敏度與適用范圍，有效解決了該領域長期存在的低樣本量檢測難題。這一技術進展為解析復雜組織中的微小亞細胞結構、異質性稀有細胞類型以及稀缺臨床樣本(如循環腫瘤細胞、早期胚胎、微量穿刺樣本)的表觀轉錄調控機制，提供了強有力的工具，有望推動相關基礎研究與轉化醫學的發展。
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