常用動物 大鼠,小鼠,性成熟,8-10周齡
適應性飼養后,用消毒棉拭子旋轉插入小鼠陰道內,并在陰道內輕輕轉動幾下后取出,涂于載玻片上,用95%酒精固定30min后晾干。涂片進行HE染色或瑞士染色,觀察動情周期。連續觀察2周,每日定時進行陰道涂片檢查,觀察動情周期。選擇連續有2個或2個以上正常動情周期(陰道涂片為大量無核角化細胞的大鼠),造模前一天每鼠肌注雌二醇0.1mg/(kg.d,大鼠),使動物統一處于動情期。
捐贈鼠和接受鼠比例為1:2。
建模方法I
大鼠:腹腔注射麻醉后,將大鼠固定于***上,腹部剪毛,消毒,并在無菌條件下開腹。在尿道口上約1cm處做垂直正中縱切口長約2-3cm進腹。大鼠子宮呈Y型,分離左側子宮,近端離左子宮角1cm處結扎,遠端離卵巢2cm處結扎,并結扎兩端間的子宮系膜血管,切除長約1.5-2.0cm的子宮段,立即放入盛有生理鹽水的培養皿中,修剪去子宮漿膜外的脂肪組織,縱向切開子宮腔,剝去漿膜層及肌層,將子宮內膜片剪成5mm×5mm大小,移植到腹壁血管豐富處,注意其內膜面與皮下組織貼合。逐層縫合傷口,待老鼠自然蘇醒后常規飼養。術后每天注射****,共3天。
建模4周后,開腹檢查所有造模大鼠移植的子宮內膜是否生長。若見移植物體積增大,形成表面被覆結締組織并有血管形成、內有液體積聚的透明小囊泡,則證明造模成功。
建模方法II
小鼠:動情期C57BL/6小鼠,脫頸椎法處死,仰臥位固定于***,腹部酒精消毒后,鋪上無菌治療洞巾,戴無菌手套,在恥骨聯合上方0.5cm處,沿正中線剖開腹腔。找到Y形子宮,小心分別牽出左、右側子宮,細心分離雙側子宮系膜。離斷宮角與卵巢,在Y形子宮分叉分別剪斷左側及右側子宮,放入裝有10mL37℃生理鹽水的無菌彎盤中,反復漂洗子宮表面的血跡,進一步分離剩余粘附的子宮系膜。將兩個子宮角分別放置于兩個無菌彎盤中,將它們直接剪成大小約1mm3的大小均等的碎片,并將它們懸浮于37℃生理鹽水中。將捐贈鼠的子宮按1:2的比例接種于受鼠腹腔,用0.3mL生理鹽水懸浮彎盤里的組織碎片。
隨機取動情期C57BL/6小鼠,取臍下0.5cm偏正中線0.5cm處的左下腹為進針點,將溶有子宮組織碎片的0.3mL生理鹽水用20號針頭連同子宮組織快碎片注入接受鼠的腹腔,后放置于鼠籠。直至第9天。隨機取動物,處死后,取異位內膜,進行冰凍切片制備,HE染色觀察異位內膜病灶是否有典型的內膜腺體及間質,提示復制動物模型是否成功。