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保存溫度
-20℃保存
注意事項
注意微生物污染
有效期
一年
儀器準備
1. 細胞計數器
2. 超低溫冰消或液氮
3. 超凈工作臺
耗材準備
1.細胞凍存管
使用注意事項
1.注意在超凈工作臺內無菌操作,盡量避免污染;
2.初次使用融化后可在4℃保存1個月,但應減少反復凍融的次數,以免失效;
3.雜交瘤細胞凍存時應定期復蘇,檢查細胞的活性和分泌抗體的穩定性。
4.以下步驟僅供參考,以實驗室常用方法為準。
使用方法
根據需要配制凍存液使用。

1. 培養細胞至對數生長晚期,顯微鏡觀察其外觀、形態、有無污染等,取狀態良好的細胞進行凍存操作。
注:(1)如為貼壁生長細胞,用消化并用培養基終止消化,進行細胞計數;
(2)如為懸浮生長細胞,進行細胞計數
2. 500~1000g離心5min,棄上清。
3. 一般按培養基:凍存用DMSO=9:1或者血清:培養基:凍存用DMSO=1:8:1等比例配制細胞凍存液。重懸細胞,使細胞濃度達到1~10x106/ml,置于凍存管中,密閉,不要擰的太緊,避免彎曲變形。
4. 一般遵循1℃/min的速率進行冷凍。亦可采用4℃ 20min,-20℃ 30min,-70℃過夜,最后置于液氮罐中長期保存。
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