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BY-1339 BHK/slam/v倉鼠腎細胞系

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BHK/slam/v倉鼠腎細胞系
BHK/slam/v倉鼠腎細胞系是基于 BHK-21 細胞經基因工程改造構建的穩定表達株,通過導入 SLAM(信號淋巴細胞活化分子)受體基因獲得特異性病毒易感能力,因受體表達穩定、病毒復制效率高,成為副黏病毒科等病毒研究及疫苗開發的專屬模型。其保留 BHK 細胞增殖迅速、易培養的核心優勢,同時賦予了 SLAM 介導的病毒感染特異性,為解析病毒入侵機制及抗病du藥物篩選提供了精準工具。
一、細胞來源與基本特性
  • 來源與構建:該細胞系以 BHK-21(幼倉鼠腎細胞)為親本,通過慢病毒載體介導將犬源或人源 SLAM 基因導入細胞基因組,經 G418 抗性篩選及單克隆純化獲得穩定株,“slam/v” 標識其表達的 SLAM 受體及病毒敏感性特征。構建過程中采用 EF1α 啟動子驅動表達,結合 kozak 序列優化翻譯起始效率,使 SLAM 受體膜定位率達 90% 以上,顯著提升病毒結合效率。

  • 形態與增殖:體外培養呈典型成纖維樣形態,貼壁生長,細胞呈長梭形,排列疏松,邊界清晰,核質比適中,形態與親本 BHK-21 細胞一致。在 37℃、5% CO?條件下,增殖速度快,傳代周期約 18-24 小時,可適應含 10% 胎牛血清的 DMEM 培養基,傳代 50 次以上仍能維持 SLAM 高表達(表達量為親本細胞的 30-40 倍),病毒敏感性無明顯衰減,優于瞬時轉染系統。

  • 表達特征:SLAM 為 I 型跨膜糖蛋白,膜表達量達(2.5-3.0)×10?分子 / 細胞(流式細胞術檢測),對副黏病毒科病毒(如犬瘟熱病毒、麻疹病毒)的親和力高(解離常數 Kd≈3×10?? M)。其胞外域可特異性結合病毒血凝素蛋白,介導病毒包膜與細胞膜融合,顯著提升病毒入侵效率(感染滴度比親本 BHK-21 細胞高 10-100 倍),且支持病毒完整復制周期(從吸附到釋放約 48-72 小時)。

二、核心應用領域
  1. SLAM 介導的病毒感染機制研究

該細胞系是解析副黏病毒科病毒入侵機制的理想模型。通過共聚焦顯微鏡可觀察 SLAM 與病毒蛋白的共定位動態(感染后 1 小時共定位率達 60% 以上),結合 pull-down 實驗篩選病毒 - 受體相互作用的關鍵氨基酸位點;或通過 CRISPR/Cas9 敲除 SLAM 基因,對比分析病毒滴度變化(下降 90% 以上),驗證其在病毒入侵中的必要性。例如,在研究犬瘟熱病毒變異株的宿主適應性時,其能清晰呈現 SLAM 受體多態性對病毒結合效率的影響,為病毒跨物種傳播機制提供實驗依據。
  1. 病毒疫苗開發與生產

在疫苗產業化中,該細胞系因病毒復制效率高,成為多種獸用疫苗的優選生產基質。例如,在犬瘟熱疫苗生產中,其支持病毒高效增殖(病毒滴度可達 10? TCID??/mL),且培養條件簡單,可通過微載體懸浮培養實現規模化生產,顯著降低疫苗成本;在麻疹病毒減毒株篩選中,其能穩定區分減毒株與野毒株的復制差異(減毒株滴度低 2-3 個數量級),為疫苗安全性評估提供量化標準。
  1. 抗病du藥物篩選與評估

該細胞系可用于篩選靶向 SLAM - 病毒相互作用的抗病du藥物。通過檢測候選藥物對 SLAM 與病毒蛋白結合的抑制率(ELISA 法)及病毒感染后的細胞病變抑制效果,評估藥物活性;其單一表達 SLAM 受體的特性,可排除其他病毒受體的干擾,精準反映藥物的特異性。例如,在篩選犬瘟熱病毒抑制劑時,可通過空斑減數實驗計算藥物的 IC??,結果重復性高(變異系數<6%),為藥物開發提供可靠數據。
三、優勢與局限性
  • 優勢:SLAM 受體表達穩定,長期傳代后病毒敏感性波動<10%,實驗重復性優于原代細胞;增殖速度快于 CHO 等細胞系,病毒培養周期縮短 30%-40%,適合高通量實驗;兼容貼壁與懸浮培養,可實現從實驗室研究到工業化生產的無縫銜接;對多種 SLAM 依賴型病毒敏感,適用范圍覆蓋犬瘟熱、麻疹、牛瘟等重要病毒,應用價值廣泛。

  • 局限性:SLAM 表達可能受培養條件影響(如血清濃度),需嚴格控制培養參數;作為倉鼠細胞,與人源 SLAM 存在物種差異,部分人病毒研究需結合人源細胞驗證;對非 SLAM 依賴型病毒敏感性低,應用范圍存在局限。

四、培養與實驗注意事項
  • 培養條件:常規使用含 10% 胎牛血清的 DMEM 培養基,添加 400μg/mL G418 維持抗性篩選,37℃、5% CO?培養箱中生長良好。傳代時控制融合度在 60%-70%,采用溫和方法分離細胞,避免過度處理影響受體表達。懸浮培養可采用無血清培養基逐步馴化,最終細胞密度可達 5×10?個 /mL,病毒產量無明顯下降。

  • 質控與安全:定期通過流式細胞術檢測 SLAM 膜表達量,病毒感染實驗驗證敏感性;STR 鑒定確保細胞純度,支原體檢測需為陰性。凍存使用含 10% DMSO 的wan全培養基,液氮保存可維持活性 5 年以上,復蘇后傳代 2 次待狀態穩定后再用于實驗,涉及高致病性病毒時需在相應生物安全實驗室操作。

五、研究意義
BHK/slam/v 細胞系的建立為 SLAM 依賴型病毒研究提供了標準化工具,推動了對副黏病毒科病毒入侵機制的理解。在基礎研究中,其助力闡明 SLAM 受體在病毒跨物種傳播中的作用,為新發傳染病預警提供理論支持;在應用領域,其提升了相關疫苗與藥物的研發效率,尤其對動物疫病防控體系的完善具有重要意義。隨著基因編輯技術的應用(如引入人源化 SLAM 突變),該細胞系將更貼近人類病毒研究需求,進一步拓展其臨床轉化價值。

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