人白細胞介素26（IL-26）elisa試劑盒

為了建立人白細胞介素-35 (IL-35) 的定量ELISA檢測方法,RT-PCR 克隆了人IL-35的IL-27EBI3亞基和IL-12p35亞基的編碼基因,在大腸桿菌中實現了2個亞基的高效表達.以大腸桿菌表達的IL-27EBI3和IL-12p35重組蛋白作為免疫原,免疫BaLb/c小鼠,選取陽性血清小鼠的脾細胞與小鼠骨髓瘤SP2/0細胞融合,用間接ELISA和有限稀釋法進行單克隆雜交瘤細胞的篩選和克隆,獲得了穩定分泌抗IL-27EBI3和抗IL-12p35單克隆抗體的雜交瘤細胞株.在效價測定和特異性鑒定的基礎上,進一步篩選出一株能穩定分泌抗IL-27EBI3單克隆抗體的雜交瘤細胞株3B11和一株能穩定分泌抗IL-12p35 單克隆抗體雜交瘤細胞株3A10,亞類鑒定兩株單抗均為IgG1.應用單抗3B11和3A10建立了IL-35雙抗夾心定量ELISA檢測方法,借助生物素-親和素放大效應,該方法檢測IL-35線性范圍為3.12–200 pg/mL,低檢測限為1.26 pg/mL,與多種其他抗原的交叉反應率為0.1%,批內相對標準偏差 (RSD) 為5.1%–5.6%,批間RSD為5.6%–7.2%,添加回收率為89%–103%,達到定量分析的要求,為進一步組裝IL-35定量ELISA檢測試劑盒打下了基礎.煤焦瀝青煙提取物(coal tar pitch smoke extract,CTP)刺激人支氣管上皮細胞(BEAS-2B)是否發生炎性凋亡(pyroptosis).方法 用l、3μg/ml的CTP分別染毒BEAS-2B細胞8、24 h,以二甲基亞砜(DMSO)為對照,用乳酸脫氫酶(lactic dehydrogenase,LDH)活力測定試劑盒和白細胞介素-1β(Interleukin-1 beta,IL-1β) ELISA試劑盒分別檢測細胞培養上清中的LDH活力和IL-1β含量,用半胱氨酸天冬氨酸特異性蛋白酶-1(caspase-1)活力測定試劑盒檢測細胞caspase-1活力.結果 染毒8h,1、3 μg/ml CTP染毒組細胞中caspase-1的活力分別為(9.29±0.30) μmol/ml和(8.67±0.59) μmol/ml,均明顯高于DMSO對照組[(7.42±0.59) μmol/ml],差異有統計學意義(P＜0.05)；1、3μg/mlCTP染毒組LDH活力和IL-1β含量與DMSO對照組的差異無統計學意義(P＞0.05).染毒24 h時,1、3μg/ml染毒組與DMSO對照組細胞中caspase-1活力差異無統計學意義(P＞0.05)；1、3μg/ml染毒組培養液上清中LDH活力[(1323.03±28.53)、(1148.45±16.42) U/dl]和IL-1β含量[(125.37±25.00)、(92.04±19.09) pg/m]均高于對照組[LDH:(1091.93±26.64) U/dl,IL-1β:(46.20±14.43) pg/ml],差異有統計學意義(P＜0.05).結論 煤焦瀝青煙提取物刺激BEAS-2B細胞早期caspase-1活力升高,繼之LDH酶活力。人白細胞介素26（IL-26）elisa試劑盒