一、技術定義與核心原理

囊胚注射是將基因修飾后的胚胎干細胞（ES細胞）注入囊胚期胚胎（發育約3.5天的小鼠胚胎），通過嵌合體培育獲得基因修飾動物模型的技術。其核心機制包括：

1. 嵌合體形成：外源ES細胞與宿主囊胚內細胞團（ICM）融合，共同發育為嵌合體后代。

2. 生殖系傳遞：ES細胞分化為生殖細胞，實現基因修飾的遺傳（需嵌合率＞60%）。

3. 時空窗口：囊胚期胚胎細胞分化程度低，且囊腔結構便于顯微操作。

生物學基礎：
囊胚由外層滋養層細胞（發育為胎盤）和內細胞團（發育為胎兒）構成，注射靶向ICM區域確保ES細胞參與胚胎發育。

二、標準化操作流程

（一）前期準備

（二）注射與胚胎移植

• 存活率控制：注射后囊胚存活率需＞90%，移植胚胎數≥10枚/受體鼠。

• 嵌合體鑒定：

• 毛色嵌合：ES細胞（如129-agouti）與宿主囊胚（如C57BL/6黑色）毛色差異直觀判斷嵌合率。

• 基因型驗證：PCR檢測外源基因或熒光標記（如GFP）。

（三）遺傳系建立

1. 高嵌合體篩選：選擇毛色嵌合＞70%的雄性嵌合鼠。

2. 生殖系傳遞：嵌合鼠與野生型交配 → F1代基因型檢測 → 建立純合品系。