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如何同時測定蛋白質純度與含量?檢測技術服務詳情介紹
在生命科學研究和生物制藥生產中,dànbáizhì的純度和含量是評估樣品質量與工藝穩定性的關鍵參數。含量(濃度)表示樣品中目標蛋白的juéduì量,而純度則反映目標蛋白相對于雜質的比例。通常檢測時,這兩項指標依賴不同的技術手段,既增加了操作復雜性,也提升了誤差風險。隨著檢測需求的提高,多技術整合正在成為實現dànbáizhì純度與含量同步測定的理想方案。
一、同步測定的意義與關鍵挑戰
單獨測定蛋白純度和含量往往需要兩次獨立實驗,涉及不同樣品處理和分析方法。這不僅增加了操作步驟,還可能因批次差異或樣品消耗而導致結果偏差。同步測定的意義在于:
一次分析同時獲得純度與含量結果,節省時間和樣品;
減少因操作步驟多而引發的誤差,提高檢測的準確性與重復性;
支持高通量分析和實時質量監控,尤其適合生物制藥工藝開發及大規模篩選需求。
關鍵挑戰則在于如何整合分離、定量及雜質分析功能,同時兼顧分析靈敏度、特異性和數據可溯性,適應復雜樣品背景。
二、主要技術
1、紫外-可見分光光度法(UV-Vis)
基于蛋白在280 nm處的特征吸收,結合已知消光系數快速估算蛋白濃度。盡管操作簡便,但其無法區分雜質成分,因為核酸及非目標蛋白也存在相似吸收特性。因此,UV-Vis適合作為初步含量估算,需結合其他手段進行純度評估。
2、高效液相色譜(HPLC)
采用反相(RP-HPLC)、體積排阻(SEC-HPLC)或離子交換(IEX-HPLC)技術,可實現蛋白組分的高分辨分離。通過積分目標峰面積占比計算純度,同時結合外標曲線或參考物質進行濃度定量。HPLC具備良好的分離效率和重現性,適合多樣品批量分析與質量控制。
3、毛細管電泳(CE)
CE依靠蛋白分子量或電荷差異進行分離,分辨率高且樣品用量低。結合紫外或熒光檢測和內標校準,可同時評估純度和定量含量,適合復雜樣品及快速檢測需求。
4、質譜(MS)與同位素內標技術
LC-MS/MS結合同位素標記肽段或全長蛋白內標,已成為蛋白含量juéduì定量的主流方法。其高靈敏度和特異性,可在復雜樣品中jīngzhǔn測定目標蛋白濃度,同時基于質譜峰圖中的雜質信息進行純度分析。若與HPLC分離結合,可在高復雜度基質中實現高通量檢測。
三、多技術整合策略
為同時實現dànbáizhì純度與含量測定,需整合具備分離能力、定量準確性及雜質識別能力的多種技術,并輔以自動化與智能數據分析:
色譜-質譜聯用:HPLC實現樣品分離,減少復雜背景干擾;LC-MS/MS提供高靈敏度juéduì定量及雜質峰分析。兩者結合兼具分離與定量優勢。
自動化與標準化流程:通過自動化系統控制樣品制備、純化和檢測,減少人為誤差,提高結果穩定性。關鍵參數(如流速、梯度、柱溫)標準化,確保批次間一致。
智能數據處理與報告生成:利用算法與zhuānyè軟件,自動識別目標峰、計算純度與含量,并生成可追溯報告,支持高通量應用和質量控制。
四、方法選擇與應用建議
樣品背景簡單:采用HPLC結合外標曲線定量,可實現同步純度與含量檢測,適合生產質量控制場景。
復雜樣品(如血清、細胞裂解液):推薦HPLC與質譜聯用方案,兼顧分離效果與高靈敏度定量,確保結果可靠。
樣品量少或需快速檢測:毛細管電泳具有高分辨率和低樣品消耗優勢,適合篩選或微量樣品分析。
快速含量估算:UV-Vis可作為預估手段,但需后續采用高分辨方法確認。
dànbáizhì純度與含量的同步測定不僅提高了檢測效率,更保障了數據的準確性與可重復性。通過色譜、毛細管電泳和質譜等技術的合理組合,輔以自動化系統與智能數據解析,可在單次分析中準確獲得兩項核心指標,適應生命科學與生物制藥對高效、jīngzhǔn檢測的需求。未來,dànbáizhì分析技術將持續向集成化、自動化和高通量方向發展,為科研和產業提供堅實的質量支撐。百泰派克生物科技致力于提供可靠的dànbáizhì分析整體解決方案,助力生命科學研究與產業轉化高質量發展。如需了解更多HPLC測定蛋白純度詳情,歡迎聯系我們獲取zhuānyè支持與定制服務!
百泰派克生物科技特色項目
一、蛋白測序
百泰派克生物科技使用Thermo公司新推出的Obitrap Fusion Lumos質譜儀及島津公司埃德曼降解測序系統對dànbáizhì序列進行分析,提供基于質譜的蛋白測序分析服務,包括對dànbáizhì的氨基酸組成分析,Nduāncèxù,Cduāncèxù和全序列分析,以及基于埃德曼降解的dànbáizhìN端序列分析服務。對于未知理論序列的dànbáizhì,提供基于從頭測序法的dànbáizhì從頭測序服務,對蛋白序列進行分析。
※服務優勢:
1.采用目前世界上優良的質譜儀器 Obitrap Fusion Lumos;
2.可實現對所測定靶蛋白序列 100% 的覆蓋;
3.可測定蛋白N端多達 70個氨基酸序列;
4.可測定多種形式的樣品: 蛋白溶液、PVDF 蛋白條帶;
5.樣品用量低: 蛋白樣品僅需 5-10ug,即可完成檢測;
6.測序不受N端封閉,PEC和和糖基化等N端修飾的影響。
二、dànbáizhì組學
百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Orbitrap Fusion Lumos質譜平臺結合Nano-LC,提供定量dànbáizhì組學、bǎxiàngdàn白zhìzǔxué、多肽組學、翻譯后修飾蛋白組學等多種dànbáizhì組學分析服務。此外,百泰派克生物科技新推出基于timsTOF Pro的4Ddànbáizhì組學服務,助力微量樣本蛋白組學、大樣本群醫學及高通量修飾組學等研究工作。
※服務優勢:
1 .高通量定量蛋白分析:多對照組大規模實驗分析,發現新的生物標記物;
2.體內體外多種dànbáizhì標記方法,適用于分析組織、細胞、血液等多種樣品;
3.質譜分析靈敏度高,實驗結果重復度高;
4.可檢測較低豐度蛋白,線性范圍廣;
5.zhuānyè生物信息學分析,分析更系統準確。
三、單細胞質譜流式技術分析
百泰派克生物科技采用Fluidigm質譜流式系統進行單細胞質譜流式技術分析,采用金屬元素標記物(通常是金屬元素標記的特異抗體)標記細胞表面和內部的分子,然后用流式細胞原理分離單個細胞,再用電感耦合等離子體質譜(ICP-MS)分析單個細胞的原子質量譜,zuì后將原子質量譜數據轉換為細胞表面和內部的信號分子表達量。
※服務優勢:
1.技術優良,*技術空白
采用金屬標記抗體技術,避免了傳統流式熒光通道少且易相互影響的問題。可在單細胞層面上對多種指標同時進行表征,百泰派克生物科技可做到同時檢測51個目標蛋白。
2.分析數量大,成本較低
單細胞RNAseq受成本等因素限制,所有樣本細胞匯總的分析數目一般在2x10^4個左右,而流式質譜技術一次(單樣本)就可分析至少10^5的細胞,實現了數量級的提高,且成本不高于單細胞RNAseq。
3.應用前景大
①流式質譜結果可以給出細胞亞群的變化,在臨床診斷、疾病機制研究等方面具有極大的研究前景;
②將金屬標簽技術與其他技術結合會有新應用方向。除常規蛋白外,質譜流式細胞技術還可用于蛋白翻譯后修飾;
③可檢測細胞存活率、細胞大小、mRNA轉錄子表達量、DNA合成速率以及蛋白酶活性等。
四、基于高精度質譜的免疫多肽組學分析及新抗原發現
百泰派克生物科技的基于高精度質譜的免疫多肽組學分析及新抗原發現一站式解決方案包括我們專有的、高度敏感的免疫肽富集和鑒定方案。我們能夠幫助您實現10,000個以上I型多肽和10,000個以上II型多肽的鑒定和識別。通過我們優化的高通量免疫多肽組學分析平臺進行免疫肽組學分析,可從zuì小的樣品材料中進行可重復的識別和定量。該服務可以應用于大規模的研究,旨在助力科研工作者尋找癌癥、免疫疾病及傳染病的解決方案,深入挖掘未知的靶標。
五、生物藥物表征
百泰派克基于高分辨率質譜技術,MALDI TOF,高效色譜分離技術,提供一系列完善的生物藥物分析方案,從dànbáizhì、多肽、抗體、疫苗等生物制品的氨基酸組成和一級結構分析,到產品變異性和純度分析。旨在提供優質生物藥物分析服務,幫助生物醫藥生產商提高生物藥物品質。
百泰派克生物科技七大檢測平臺
百泰派克生物科技-生物制品表征,生物質譜多組學優質服務商
北京百泰派克生物科技有限公司致力于為生物/制藥和醫療器械行業提供質量控制檢測和項目驗證等zhuānyè服務。公司實驗室遵循NMPA、ICH、FDA和EMA等的法規和指導原則,通過CNAS/ISO9001雙重質量體系認證,建立了完備的質量體系,數據冷熱/異地備份,設備定期計量/期間核查,軟件審計追蹤,為客戶提供一體化解決方案和技術服務,支持新藥研發、藥物申報注冊和生產放行。
1.公司采用ISO9001質量控制體系,zhuānyè提供以質譜為基礎的CRO檢測分析服務;
2.獲國家CNAS實驗室認可,為客戶提供符合全球藥政法規的藥物質量研究服務;
3.業務范圍覆蓋dànbáizhì組學、多肽組學、代謝組學、生物藥物表征、單細胞分析、單細胞質譜流式、生信云分析以及多組學生物質譜整合分析等;
4.七大質量控制檢測平臺,滿足您一站式服務需求;
5.服務3000+企業,10000+客戶的選擇;
6.致力于為您提供優質的生物質譜分析服務!