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寡核苷酸類藥物檢測之尺寸排阻(SEC)色譜柱

閱讀:2610      發(fā)布時間:2023-5-19
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寡核苷酸類藥物檢測之尺寸排阻(SEC)色譜柱

隨著寡核苷酸藥物的研發(fā)步伐越來越快,對高純度寡核苷酸產(chǎn)品的需求也日趨旺盛。在今天的推送內(nèi)容里,我們將介紹尺寸排阻色譜法在寡核苷酸藥物質(zhì)量控制中的應(yīng)用。

在寡核苷酸的分析中,尺寸排阻分離模式是基于堿基數(shù)量、磷酸基不同導(dǎo)致的分子量差別進(jìn)行分離,通常用于簡單的質(zhì)量控制或純度研究。該模式的優(yōu)點是可以使用接近生理條件的洗脫溶液進(jìn)行等度分離。有時也會添加水溶性有機溶劑來抑制疏水吸附。

分析不同堿基數(shù)目的寡核苷酸

下圖是采用兩根串聯(lián)的SEC色譜柱TSKgel UP-SW2000來區(qū)分長度相差一個堿基的寡核苷酸混合物 (20-merN-1 19-mer)

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TSKgel UP-SW2000是東曹生命科學(xué)最新開發(fā)的粒徑2μm、孔徑12.5nm的硅膠基質(zhì)SEC色譜柱,主要用于分離分子量范圍為1-150kDa的小蛋白、肽和寡核苷酸等生物分子。該色譜柱兼容HPLCUHPLC系統(tǒng),因此也能夠從傳統(tǒng)的HPLC-SEC方法轉(zhuǎn)換到UHPLC

下圖是使用TSKgel G2000SWXL色譜柱分離不同堿基數(shù)量的合成寡核苷酸混合物的譜圖。為了抑制核酸酶活性,有時會在流動相中添加EDTA等約1 mmol/L的螯合劑。

 

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SEC法分離脂質(zhì)體包被的siRNA

下圖是使用TSKgel SuperSW2000色譜柱對天然型DNA核酸藥物Defitelio進(jìn)行質(zhì)量分析的示例。

 

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參考文獻(xiàn):Handbook of analysis of oligonucleotides and related Products, Feb.23 (2011) 125, Edited by J.V. Bonilla et al.

 

寡核苷酸分析用SEC色譜柱

下表中列出了適用于核酸分離的SEC色譜柱。對于<375 bp的短鏈核酸或寡核苷酸,UP-SW3000UP-SW2000G3000SWXL以及G2000SWXL這幾款色譜柱都是比較推薦的。

 


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