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RNA純化方法及沉淀
點擊次數(shù)：5301 發(fā)布時間：2017-5-18
RNA純化要求---RNA樣品中不應(yīng)存在對酶（如逆轉(zhuǎn)錄酶）有抑制作用的有機(jī)溶劑和過高濃度的金屬離子，避 免其他生物大分子如蛋白質(zhì)，多糖和脂類分子的污染，排除DNA分子的污染。
一、RNA純化方法及沉淀---有機(jī)溶劑抽提法
1、抽提
在使用RNA提取試劑進(jìn)行RNA提取時，常使用進(jìn)行抽提，以去除蔗糖、蛋白質(zhì)等雜質(zhì)，并促進(jìn)水相與有機(jī)相的分離，從而達(dá)到純化RNA的目的。抽提RNA后，一般采用異丙醇或乙醇來沉淀水相RNA。加入0.6倍水相體積的異丙醇或與水相等體積的異丙醇，室溫沉淀20-30min，高速離心，可獲得RNA沉淀。
2、洗滌沉淀
加入無RNase的75%乙醇，將RNA沉淀震蕩懸浮，使RNA沉淀中的鹽離子被充分溶解。然后在離心10-30min，再次沉淀RNA。離心后，小心倒掉上清（注意不要倒出RNA沉淀），隨后短暫離心，將殘留在管壁上的乙醇收集到管底后，用小槍頭吸凈，超凈臺中風(fēng)干1-2min（注意不要太干，否則RNA沉淀不易溶解）。
3、溶解沉淀
加入適量RNase-Free Water溶解RNA沉淀。
二、RNA純化方法及沉淀---硅基質(zhì)吸附法
隨著實驗方法的改進(jìn)，現(xiàn)已發(fā)展出一種采用吸附材料純化核酸的方法。目前較常見的有：硅基質(zhì)吸附材料、陰離子交換樹脂和磁珠等。硅基質(zhì)吸附材料因其具有可特異吸附核酸，使用方便、快捷，不使用有毒溶劑如苯酚、等優(yōu)點，成為核酸純化的。