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培養基如何消除組織培養的污染？
點擊次數：1602 發布時間：2016-5-6
培養基一類型細胞沒有固定的培養條件。在MEM中培養的細胞，很可能在DMEM或M199中同樣很容易生長。總之，MEM做粘附細胞培養、RPMI- 1640做懸浮細胞培養，各種目的無血清培養的是AIM V培養基（SFM）。在開始進行新的細胞培養時，如何消除組織培養的污染？可以參考下表所列的條件：
如何消除組織培養的污染？
當重要的培養污染時，研究者可能試圖消除或控制污染。首先，確定污染物是細菌、真菌、支原體或酵母，把污染細胞與其它細胞系隔離開，用實驗室消毒劑消毒培養器皿和超凈臺，檢查HEPA過濾器。
高濃度的抗生素和抗霉菌素可能對一些細胞系有毒性，因而，做劑量反應實驗確定抗生素和抗霉菌素產生毒性的劑量水平。這點在使用抗生素如兩性霉素B和抗霉菌素如泰樂菌素時尤其重要。下面是推薦的確定毒性水平和消除培養污染的實驗步驟。
① 在無抗生素的培養基中消化、計數和稀釋細胞，稀釋到常規細胞傳代的濃度。
② 分散細胞懸液到多孔培養板中，或幾個小培養瓶中。在一個濃度梯度范圍內，把選擇抗生素加入到每一個孔中。例如，兩性霉素B推薦下列濃度，0.25，0.50，1.0，2.0，4.0,8.0 mg/ml。
③ 每天觀測細胞毒性指標，如脫落，出現空泡，匯合度下降和變圓。
④ 確定抗生素毒性水平后，使用低于毒性濃度2－3倍濃度的抗生素的培養液培養細胞2－3代。
⑤ 在無抗生素的培養基中培養細胞一代。
⑥ 重復步驟4。
⑦ 在無抗生素的培養基中培養4－6代，確定污染是否以已被消除。
培養基操作建議：
1、商品化的應根據使用說明書上的要求進行儲存。標簽上應標有批號，生產日期、有效期及有關特性。所采用的保藏和運輸條件應使限度失去水分并提供機械保護。
2、配制好之后應保存在2～25℃避光的環境。若保存于非密閉容器中，一般在三周內使用；若保存于密閉容器中，一般在一年內使用，瓊脂培養基不得在0℃或0℃以下存放，防止冷凍破壞凝膠特性。若要長期保存，瓊脂平板應密閉包裝或置于密閉容器中以防止水分流失。
3、保存于密閉容器中，可防止水分流失以延長保存時間。
4、滅菌后應立即取出，不得儲藏在高壓菌器中，避免影響質量。制備好之后應保存在2～25℃、避光的環境。
5、固體培養基滅菌后的再融化應在加熱的水浴中或采用流通蒸汽進行，只允許一次，融化后應放在45～50℃的水浴中，不得超過8小時。