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研域(上海)化學(xué)試劑有限公司
中級(jí)會(huì)員 | 第18年

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ELISA試劑盒常見的定量方法策略

時(shí)間:2017/8/3閱讀:1745
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ELISA試劑盒測(cè)定原理:
現(xiàn)在皮質(zhì)醇ELISA試劑盒除非是測(cè)定抗體的以外,一般使用的是雙抗體夾心法,此種方法大多數(shù)用的是增強(qiáng)的雙抗體夾心法,即使用生物素-親和素系統(tǒng),及少數(shù)的指標(biāo)可能使用競(jìng)爭(zhēng)法,這類方法適用于半抗原的測(cè)定。具有復(fù)雜結(jié)構(gòu)的多表位蛋白抗原,其雙抗體夾心法中的一個(gè)抗體必須用單抗,否則背景很高。當(dāng)然如果兩個(gè)都是單抗(這兩個(gè)單抗針對(duì)不同表位),那么測(cè)定的線性范圍就較寬,試劑盒性能就較好;一個(gè)用單抗,一個(gè)用多抗,測(cè)定的靈敏度會(huì)較高。

ELISA試劑盒測(cè)定時(shí):
因?yàn)闆]有兩個(gè)或以上的表位,一般只能作為半抗原,只能用競(jìng)爭(zhēng)法測(cè)定。如果你發(fā)現(xiàn)有測(cè)定簡(jiǎn)單化合物(如雌激素、NO、)用雙抗體夾心法作測(cè)定原理時(shí),這個(gè)試劑盒你就要懷疑了。另外還要說明一步雙抗體夾心法與兩步雙抗體夾心法的區(qū)別。一步雙抗體夾心法的吸光度-劑量曲線呈鐘形,隨著待則標(biāo)本中抗原濃度的增加而升高至一定程度后,測(cè)定吸光度即隨抗原濃度的增加而開始下降直至不顯色所以當(dāng)使用一步雙抗體夾心法時(shí),樣品濃度太高,有時(shí)會(huì)出現(xiàn)測(cè)不出來的現(xiàn)象,此時(shí)要作適當(dāng)?shù)南♂尣拍軠?zhǔn)確測(cè)定。

ELISA試劑盒的組成:
用雙抗體夾心法作為測(cè)定的方法時(shí),試劑盒的組成一般包括:已包被單抗的酶標(biāo)板:一塊,有96孔的,也有48孔的,可拆缷,鋁箔袋密封,打開后有干燥劑,實(shí)驗(yàn)時(shí)暫未使用的酶標(biāo)條要連帶干燥劑密封好,放在4℃冰箱中妥善保存。

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