ELISA方法被廣泛應用于各種抗原和抗體測定。除了盒子本身質量外，操作中很多因素都影響試驗的正常結果。*常出現的問題是顯色淡，靈敏度偏低、重復性不佳、假陽性結果和假陰性結果，不管出現什么樣的結果，不但浪費客戶的金錢、樣本、精力，更重要的是對臨床做出了危險判斷。在這里我們分析ELISA試驗非正常檢測結果產生的常見原因，并探討其解決辦法，以提高檢測質量。

1. 標本的采集與保存

當標本采集保存不當產生溶血時，紅細胞中的血紅蛋白釋放到血清中，血紅蛋白具有過氧化物酶的性質，其通過吸附或“PP效應"

(蛋白質間相互吸附的現象)結合后，可催化、B液顯色而造成假陽性標本采集保存不當致細菌污染，菌體中可能含有內源性HRP，會產生假陽性反應;標本在冰箱中保存時間過長導致血清IgG聚合，易使間接法的試驗本底加深。因此，標本宜在新鮮時檢測。

反復凍融血清會使抗體效價跌落，所以測抗體的血清標本如需保存做多次檢測，宜少里分裝凍存。

2.加樣

如果ELISA試驗樣品稀釋液少加或血清多加，都會引起本底增高。對于間接法來說，受上述兩個因索影響更大。因為血清中受檢的特異性IgG只占IgG中的一小部分。IgG的吸附性很強，非特異性IgG可直接吸附到固相載體上，有時也可吸附到包被抗原的夫面。這些非特異性的IgG均可以和酶標二抗發生反應而造成較高陰性本底或假陽性。如果加入的血清過多，高于規定的稀釋倍數，極易造成高值陰性。反之，造成假陰性。