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實(shí)驗(yàn)時(shí)，應(yīng)分別以陽性對(duì)照與陰性對(duì)照控制實(shí)驗(yàn)條件，待檢樣品應(yīng)作一式二份，以確保實(shí)驗(yàn)作用的準(zhǔn)確性。有時(shí)本底較高，闡明有非特異性反應(yīng)，可選用羊血清、兔血清或BSA等封閉。

 上海研域生物在ELISA試劑盒當(dāng)中，進(jìn)行各項(xiàng)實(shí)驗(yàn)條件的選擇是很重要的，其間包含：

1. 固相載體的選擇：許多物質(zhì)可作為固相載體，如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等。其方法可所以凹孔平板、試管、珠粒等。現(xiàn)在常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何種載體，在運(yùn)用前均可進(jìn)行篩選：用等量抗原包被，在同一實(shí)驗(yàn)條件下進(jìn)行反應(yīng)，調(diào)查其顯色反應(yīng)是否均一性，據(jù)此判明其吸附功能是否良好。

2. 包被抗體(或抗原)的選擇：將抗體(或抗原)吸附在固相載體外表時(shí)，要求純度要好,吸附時(shí)一般要求PH在9.0～9.6之間。吸附溫度，時(shí)間及其蛋白量也有必定影響,一般多選用4℃18～24小時(shí)。蛋白質(zhì)包被的zui適濃度需進(jìn)行滴定：即用不同的蛋白質(zhì)濃度(0.1、1.0和10μg／ml等)進(jìn)行包被后，在其它實(shí)驗(yàn)條件相一同，調(diào)查陽性標(biāo)本的OD值。選擇OD值最大而蛋白量最少的濃度。關(guān)于多數(shù)蛋白質(zhì)來說一般為1～10μg／ml。

3. 酶符號(hào)抗體作業(yè)濃度的選擇：首先用直接ELISA法進(jìn)行開始效價(jià)的滴定(見酶符號(hào)抗體部份)。然后再固定其它條件或采納“方陣法"(包被物、待檢樣品的參閱品及酶符號(hào)抗體分別為不同的稀釋度)在正式實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)里準(zhǔn)確地滴定其作業(yè)濃度。 

4. 酶的底物及供氫體的選擇：對(duì)供氫體的選擇要求是價(jià)廉、安全、有明顯地顯色反應(yīng)，而本身無色。有些供氫體有潛在的致癌作用，應(yīng)留意防護(hù)。有條件者應(yīng)運(yùn)用不致癌、靈敏度高的供氫體，如TMB和ABTS是現(xiàn)在較為滿意的供氫體。ELISA試劑盒底物作用一段時(shí)間后，應(yīng)參與強(qiáng)酸或強(qiáng)堿以停止反應(yīng)。一般底物作用時(shí)間，以10-30分鐘為宜。底物運(yùn)用液有必要新鮮配制，尤其是H2O2在臨用前參與。 

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