| 5~10 mL 細菌培養液中純化提取30~70ug高純度質粒DNA。 試劑盒組分 | Catalog# | PD1213-01 | | Preps | 50 | | ezBind Columns | 50 | | Buffer A1 | 25 mL | | Buffer B1 | 25 mL | | Buffer N1 | 30 mL | | Buffer KB | 30 mL | | DNA Wash Buffer* | 15 mL | | Elution Buffer | 15 mL | | RNase A （20 mg/mL） | 2.5 mg （125 µL） | | User Manual | 1 | 保存條件： RNAse A在4℃下可以保存一年，Buffer A1加入RNase A 后4℃保存，其它組分室溫保存。 注意事項： - 使用前請將適量乙醇加入DNA Wash Buffer，令乙醇終濃度為80%
- 純化中低拷貝的質粒時，使用2倍的菌液體積，2倍的Buffer A1,B1,N1, 相同體積的Wash Buffer和Elution Buffer
- 若為-70oC甘油凍存的菌，請先涂布平板培養后，再重新挑選新的單個菌落進行培養。
- 若用于提取1-4 mL的菌落，請將Buffer A1, B1, N1的量降低至250 µL, 250 µL 及 350 µL，DNA wash Buffer及Elution Buffer的量不變。
操作步驟： - 接種新鮮的單個菌落到5-12 mL的LB培養基（含適量抗生素），37oC震蕩培養14-16小時（勿超過16小時）。室溫下10,000 rpm離心1分鐘，收集菌體，并盡可能的吸去上清。
- 加入450 µL Buffer A1（確保已加入RNase A），用移液器或渦流震蕩充分懸浮細菌細胞。
- 加入 450 µL Buffer B1, 輕輕地反轉多次至溶液充分混勻，室溫靜置2-5分鐘至溶液粘稠而澄清。
- 加入550 µL Buffer N1, 立即反轉多次，至溶液充分混勻，此時出現白色絮狀沉淀。
- 將離心管轉至高速離心機，在室溫下13,000 rpm離心10分鐘（若上清中有白色沉淀，可再次離心）。
- 小心吸取700 µL離心后的上清液至帶有收集管的DNA柱中（避免吸起沉淀），室溫下13,000 rpm 離心1分鐘，倒掉收集管中的廢液，將離心柱重新放回到收集管中。重復步驟“7”至全部上清離心過DNA柱。
- 可選: 向DNA柱中加入 500 µL Buffer KB, 室溫下13,000 rpm 離心1分鐘，倒掉收集管中的廢液，將離心柱重新放回到收集管中。
- 向離心柱中加入650 µL DNA Wash Buffer（確保已加入無水乙醇），室溫下，13,000 rpm 離心1分鐘，倒掉收集管中的廢液，將離心柱重新放回到收集管中。重復步驟“8”。
- 將離心柱放回高速離心機中，13,000 rpm室溫下開蓋離心2分鐘，以*去除殘留的乙醇。
- 將離心柱轉至一個新的1.5 mL離心管中，向DNA柱的正中間加入100~150 µL（體積>100 µL）的ddH2O（pH在7.0-8.5之間）或Elution Buffer，室溫放置2分鐘，13,000 rpm 離心1分鐘，洗脫質粒DNA。將洗脫液再加到柱的中間，13,000 rpm 離心1分鐘，洗脫質粒DNA。
操作流程：  |
