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Roche原裝* DIG Gel Shift Kit, 2nd gen
  • Roche原裝* DIG Gel Shift Kit, 2nd gen
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貨物所在地:上海上海市

地: usa

更新時(shí)間:2025-03-12 21:00:48

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Roche原裝 *

使用該DIG凝膠移位套件制備非放射性,3'-末端標(biāo)記的寡核苷酸探針,所以它們可用于檢測(cè)DNA-蛋白質(zhì)復(fù)合物中的“凝膠遷移率變動(dòng)分析

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        Roche原裝* DIG Gel Shift Kit, 2nd gen 

 

產(chǎn)品簡(jiǎn)介:

 

 

應(yīng)用

使用該DIG凝膠移位套件制備非放射性,3'-末端標(biāo)記的寡核苷酸探針,所以它們可用于檢測(cè)DNA-蛋白質(zhì)復(fù)合物中的“凝膠遷移率變動(dòng)分析。” 

 

優(yōu)點(diǎn)

  • 方便的,因?yàn)樵摷夹g(shù)不需要特殊的設(shè)備或技術(shù)
  • 可重復(fù)性,因?yàn)榈馗咝翗?biāo)記的探針是穩(wěn)定的無(wú)限期
  • 安全,因?yàn)槭菬o(wú)放射性的檢測(cè)
  • 可靠的,因?yàn)樵摴ぞ甙峁└咝翗?biāo)記的寡核苷酸建立檢測(cè)工作 
  • 功能測(cè)試  套件中提供的控件(參見(jiàn)下面的“質(zhì)量”。) 
  • 敏感的,因?yàn)樵撛噭┖锌蓹z測(cè)低至20 fmol的對(duì)照寡核苷酸(它被標(biāo)記后,根據(jù)試劑盒協(xié)議)
 

 

Roche原裝* DIG Gel Shift Kit, 2nd gen    

 

 6016 *【

   

上海索寶*   

產(chǎn)品明細(xì):

 

產(chǎn)品描述

附圖描述
的試劑盒包含nonradioactve 3'-末端標(biāo)記的寡核苷酸的試劑,所以它們可以用于在一個(gè)“凝膠遷移”測(cè)定法。它還包含控制,電泳試劑,和一種酶標(biāo)記的抗體,以促進(jìn)DNA-蛋白質(zhì)復(fù)合物的檢測(cè)。注:重組末端轉(zhuǎn)移酶和DIG-11-ddUTP的組合使得非常靈活的標(biāo)記反應(yīng)。它可用于標(biāo)記的任何寡核苷酸的3'-末端(它是否有5'-突出端,3'突出端或平末端)。無(wú)論是單鏈和雙鏈DNA可以貼上標(biāo)簽。

樣品
量:3.85皮摩爾或100 ng  
類(lèi)型:5'-突出末端,3'-突出末端或平末端的寡核苷酸與 
單鏈或雙鏈的DNA段(30 -約200 bp)注:在理想情況下,被標(biāo)記的片段應(yīng)介于30和100個(gè)基點(diǎn)。(請(qǐng)參閱下面的更多細(xì)節(jié)“注意事項(xiàng)”)。

所需時(shí)間
退火和標(biāo)簽的寡核苷酸:10分鐘
形成的寡核苷酸-蛋白質(zhì)復(fù)合物:25分鐘
電泳:1小時(shí)至過(guò)夜,根據(jù)電泳系統(tǒng)
印跡:1 - 2小時(shí)
免疫學(xué)檢測(cè):2小時(shí)
曝光透視膜或成象:15 - 40分鐘 

 

背景資料

DNA-蛋白質(zhì)相互作用的研究得到了極大的便利,在近幾年的快速和簡(jiǎn)單的“凝膠阻滯”或“凝膠遷移”法。由于游離DNA和DNA-蛋白質(zhì)復(fù)合物的凝膠電泳期間不同遷移,它們可以被分離,并上檢測(cè)到本機(jī)(非變性)的聚丙烯酰胺或瓊脂糖凝膠電泳。

 

內(nèi)容

  1. 貼標(biāo)緩沖液(5倍濃度),80微升
  2. 氯化鈷2解決方案(25毫米),80微升
  3. 的DIG-ddUTP解決方案(1 mM的地高辛-11-ddUTP),20微升
  4. 重組末端轉(zhuǎn)移酶(400 U /μl),20μL
  5. 結(jié)合緩沖液(5倍濃度),800μL
  6. 控制雙鏈39mer,未標(biāo)記的寡核苷酸(0.1微克/微升,3.85皮摩爾/微升),40微升
  7. 地高辛標(biāo)記的對(duì)照寡核苷酸(DS 39mer,0.4納克/微升,15.54 fmol /μL),140μL
  8. 25 - 75 ng /μl的,控制因素Oct2A(),40μL 
  9. 聚并[d(IC)](0.1微克/微升),200微升
  10. 聚并[d(AT)](0.1微克/微升),加入200μl
  11. 聚L-賴(lài)氨酸(0.1微克/微升雙蒸水),200微升
  12. 無(wú)溴酚藍(lán)上樣緩沖液,1毫升
  13. 與溴酚藍(lán)上樣緩沖液,1毫升
  14. 抗地高辛-AP(750 U / ml)的40微升
  15. CSPD(10毫克/毫升),440微升
  16. 阻斷劑,50克
 

原則

該的DIG凝膠遷移工具包使用探針,末端標(biāo)記地高辛-11-ddUTP來(lái)檢測(cè)特定序列的DNA結(jié)合蛋白。

標(biāo)記的DNA段,該片段包含感興趣的序列的培養(yǎng)的細(xì)胞提取物或純化的因子。非特異性的DNA [聚d(AT),聚d(lC的),該試劑盒中提供的]加入萃取液中,以防止形成大的非特異性蛋白-DLG-標(biāo)記的DNA復(fù)合物(這將保持在凝膠的頂部,并導(dǎo)致涂抹在凝膠電泳)。

將混合物轉(zhuǎn)移到一個(gè)本地的聚丙烯酰胺凝膠電泳分離。分離之后,被轉(zhuǎn)移到帶正電荷的尼龍膜的寡核苷酸 - 蛋白質(zhì)復(fù)合物,通過(guò)電泳,毛細(xì)管轉(zhuǎn)移,或印跡。

地高辛標(biāo)記的配合物,在膜上的免疫測(cè)定法中檢測(cè)到。堿性磷酸酶共軛的抗體[抗洋地黃毒苷-AP(Fab片段)]結(jié)合的地高辛標(biāo)記的oligonucleotides.The固定化堿性磷酸酶去磷酸化的化學(xué)發(fā)光底物CSPD。CSPD在去磷酸化過(guò)程中,發(fā)射光,它可以被記錄的X-射線膠片上。化學(xué)發(fā)光信號(hào)通常可以被檢測(cè)到后,膜被暴露于15 - 40分鐘的膜。(參見(jiàn)“典型的實(shí)驗(yàn)”一節(jié))。程序的主要階段:
 

  1. DIG重組末端轉(zhuǎn)移酶的3'-末端標(biāo)記的雙鏈寡核苷酸與
  2. 凝膠移位反應(yīng)DIG 3'-末端標(biāo)記的寡核苷酸,其中培養(yǎng)的細(xì)胞提取物或純化的因子
  3. 聚丙烯酰胺凝膠電泳,使用快速電泳系統(tǒng)(Pharmacia)的
  4. 寡核苷酸轉(zhuǎn)移到尼龍膜(雜交)
  5. 交聯(lián) 
  6. 化學(xué)發(fā)光法檢測(cè) 
 

典型的實(shí)驗(yàn)



圖1: 地高辛標(biāo)記的寡核苷酸檢測(cè)。

 

 

     

上海索寶*  

    

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Shanghai solarbio Bioscience & Technology Co.,LTD

        
上海索萊寶生物科技有限公司是一家集銷(xiāo)售生化試劑、實(shí)驗(yàn)耗材、自產(chǎn)分子生物學(xué)產(chǎn)品為一體,并能提供的專(zhuān)業(yè)性生物科技公司。公司秉承以客戶(hù)為中心,以產(chǎn)品為保障、以誠(chéng)信為基礎(chǔ)、以創(chuàng)新為宗旨的發(fā)展理念,在依靠客戶(hù)的大力支持和員工的不懈努力下獲得了快速的成長(zhǎng)。

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立足北京,上海,*,隨著產(chǎn)品營(yíng)銷(xiāo)戰(zhàn)略的不斷延伸,我們將逐步發(fā)展成為*的專(zhuān)業(yè)性生物科技公司。我們希望能夠和尊敬的客戶(hù)一起,利用各自的資源優(yōu)勢(shì)和勇于進(jìn)取的敬業(yè)精神,為中國(guó)生命科學(xué)研究的發(fā)展作出更多的貢獻(xiàn)。

為了更好、更全面的發(fā)展,現(xiàn)公司正在誠(chéng)招各地代理商和招聘若干銷(xiāo)售、研發(fā)人員,歡迎垂詢(xún)并期待您的加入!

 

     

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