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ELISA等免疫學方法檢測飼料中的動物源性成分
閱讀：866 發(fā)布時間：2010-11-2免疫學方法用于物種的鑒定已有很長的歷史，早在20世紀初建立在特異性抗體—抗原反應之上的免疫學方法就已經(jīng)被應用于肉的種類鑒別，現(xiàn)在已有多種試劑盒被研發(fā)出來用于飼料中動物源性成分的檢測。其主要原理是應用抗原與抗體的特異性結合，即用一個物種的特異性抗原制作特異性抗體，然后用此抗體檢測樣品中有無特異性的抗原進而用于檢測樣品中有無此物種的成分存在。然而，肉骨粉一般都要經(jīng)過高溫高壓處理，在這個過程中許多蛋白質都發(fā)生了變性，失去了抗原性和水溶性，這就給檢測帶來了困難。
為了使用免疫學方法鑒定動物成分的種類，必須選擇合適的動物種類標記作為抗原，其中肌肉組織的蛋白質具有較高的價值，應用針對肌肉組織特異性蛋白的單克隆抗體建立的免疫檢測方法能夠檢測肌肉組織，而不會與血液和包括牛奶、蛋清、蛋黃等在內的食品蛋白發(fā)生交叉反應。目前已發(fā)現(xiàn)幾種熱穩(wěn)定的蛋白質可以作為檢測的目的蛋白，其中包括肌鈣蛋白TnI。Hsieh等成功地研制了針對TnI的幾種不同單克隆抗體，運用這些單抗建立了鑒定哺乳動物、反芻動物和單個動物（如豬、雞）的ELISA方法，可以對經(jīng)過熱處理的動物組織成分進行檢測，針對TnI的單抗可以檢測出經(jīng)過132~C 2h處理的肌肉而不降低效果。建立在TnI特異性單抗基礎上的夾心ELISA已經(jīng)應用于禁止動物蛋白如反芻動物、哺乳動物和所有動物種類的檢測上。
ELISA方法由于它具有簡單、特異和靈敏度高的優(yōu)點，被廣泛應用于食品和飼料中的肉類品種鑒別，并且ELISA不需要大型的科學設備，容易操作，可以進行大規(guī)模檢測。然而檢測的成功應首先建立在有可靠的捕獲抗原的檢測抗體之上。多抗和單抗都曾經(jīng)應用在各種ELISA檢測中，zui近一些針對熱處理穩(wěn)定的動物蛋白的單抗被研制出來，一旦獲得價的單抗就可以進行長期穩(wěn)定的大量制備。
夾心ELISA適合于樣品的檢測，應用廣泛，已經(jīng)有多種商品試劑盒被開發(fā)出來，如ELISATechnologies公司的MELlSA—TEKMeatSpeciesKit可以對肉骨粉、飼料、烹飪過的和生肉中的反芻動物成分和豬肉成分進行檢測，靈敏度zui低可以達到0．05％。
可以進行快速診斷的免疫試劑條試劑盒（1ateralflow strip test kit）也被開發(fā)出來，如Neogen公司的Revealruminantfeed／MBM，可以對飼料或肉骨粉中的反芻動物成分進行檢測，可以在十幾分鐘內得到結果。
免疫測定快速，操作簡單，不需要對工作人員進行特殊的培訓。例如上面提到的試紙條只要求將肉骨粉煮10rain在一種緩沖液中，然后將試紙條在這種溶液中放置lOmin，即可以讀取結果。下一步研究的重點是進一步開發(fā)更有效的抗體和從飼料中提取蛋白的方法。總之，若敏感性和特異性都能達到要求，免疫學方法從它的實用性上可以被看作為篩選方法，然而需要其他更的方法來確定被檢樣品結果的有效性。