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標記蛋白的概述
閱讀：2934 發布時間：2010-11-24從建立了克隆表達技術以來，將2個編碼區域融合構建一個具有2個起始多肽特性的新蛋白， 已廣泛應用于科學研究中。下圖利用來源于c-myc蛋白表位結構的詳細知識，構建了一個可供商品化抗體識別的新蛋白。這種方法已經成為分子克隆的主要技術，任何新識別的編碼區均可通過在多肽上加一個表位序列，即可被特異性抗體識別。亦可將其他感興趣的蛋白或功能區的編碼基因與研究中的抗原基因融合，如將所研究的蛋白質編碼基因與谷胱甘肽—S—轉移酶（GST）基因融合，并可在E．coli中合成一個可溶性蛋白，該蛋白可通過與谷胱甘肽珠結合得到純化。目前已有許多有價值的其他純化標記物得到了廣泛的應用。新近GFP融合技術的應用，更加豐富了這一領域的內容，該技術通過使用非免疫的檢測方法對蛋白進行定位。這一技術的發展為蛋白標記物的應用提供了新的方式。
采用DNA重組技術對蛋白進行標記，并可在不同的宿主細胞系統中對其進行純化和特異性檢測，包括為進行檢測（如綠色熒光蛋白標記物，GFP）或純化（如His標記物和谷胱甘肽—S—轉移酶標記物）而設計的特異性標記物。目前已經制備出與短肽序列（表位標記物）結合力較強且特異性高的抗體，標記蛋白已被廣泛應用，并已建立了為蛋白的調節、結構和功能研究的新方法。
傳統的方法多以放射性同位素或熒光染料標記蛋白，標記過程中要求有純化的蛋白質。通過DNA重組方法標記蛋白是一重大的技術發展，該方法在蛋白質合成過程中將標記物（1abel或tag）直接連接到蛋白質上。標記物本身是一個小的開放閱讀框，在研究中，采用分子生物學技術將其與目的蛋白融合。
DNA重組技術的先進性在于可在各種表達系統中制備和檢測標記蛋白，并可通過標記物對雜交蛋白進行檢測和純化。目的蛋白可與綠色熒光蛋白）或谷胱甘肽—S—轉移酶蛋白（GSF）等標志物融合，或與一些短肽，如His標記物以及能夠與鏈霉親和素結合的標記物融合，其中短肽可與特定的配體結合。
肽標記的另一方法是表位標記，即將1個短的氨基酸序列插入到靶蛋白編碼區，其氨基酸序列可與已知的單克隆抗體或多克隆抗體結合，從而可采用各種免疫技術檢測和純化標記的靶蛋白，因已有商品化的特異性針對標記物的抗體。
DNA重組標記技術的成功是因為標記并不改變被標記蛋白的功能，特別有兩大進展使得標記技術切實可行：①通過合成寡核苷酸和PCR技術將標記物插入到蛋白表達載體中；②在病毒、細菌、植物、酵母、昆蟲和哺乳動物細胞系統中可表達重組標記蛋白。應用針對5～10個氨基酸線性表位的單克隆抗體對表位作圖，為實驗研究提供了大量標記物，從而可以同時對多種不同的標記蛋白活性進行分析。
標記的*步是獲得編碼蛋白質的基因克隆和經過測序的開放閱讀框，并具備分子生物學技術知識和工作經驗，包括克隆、測序和PCR技術。這些方法在Sambrook等（1989）的著作中有詳細描述。
標記物一般用于兩個目的：①蛋白檢測：即標記物的引入使得能夠檢測細胞表達系統中的標記蛋白，從而可對蛋白的功能、蛋白質在細胞的定位以及相互作用和生化活性進行研究；②蛋白純化：即選擇一種可以與某種固相化配體結合的標記物，從而可以從細胞抽提物中批量純化蛋白。