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α2巨球蛋白（α2M） 的測(cè)定
閱讀：823 發(fā)布時(shí)間：2010-12-23α2巨球蛋白（α2-macroslobulin，α2M）是血清中有重要生物學(xué)活性的大分子糖蛋白，分子量725kD。主要由肝臟合成，骨骼肌也能合成，半壽期約10d。α2M是一種廣譜蛋白酶抑制劑，可與多種肽鏈內(nèi)切酶形成不可逆性復(fù)合物，是纖溶酶的主要抑制物，在維持出、凝血平衡上具有重要作用。它除具有抗放射損傷作用外，尚可參與免疫調(diào)控。業(yè)已證實(shí)，α2M在體內(nèi)外能抑制多種免疫反應(yīng)，與慢性肝、腎疾病的關(guān)系較為密切。因?yàn)檠逯?alpha;2M含量較高，故用單向免疫擴(kuò)散法、火箭電泳法、速率散射濁度法等即可檢測(cè)。在純化α2M的基礎(chǔ)上，制備α2MMcAb，建立敏感性、特異性及度較高的ELISA法，可以檢測(cè)含量很低的尿液中的α2M。現(xiàn)介紹雙抗體夾心ELISA法檢測(cè)尿中a2M。
1．試劑 α2M的制備：取抗凝血漿1份加0．02mol／LpH7．4PBS2份，于攪拌下緩慢滴加50％PEG 6 000，使PEG的zui終濃度為4％，攪拌15rain后，離心棄上清。沉淀用生理鹽水溶解后過Sepharose 4B-抗人a2MMcAb親和層析柱，充分洗脫后，用3mol／LKCNS解吸附，解離液用生理鹽水透析后再過Sepharose4B-抗人IgC柱，吸附殘留的IgG，收集穿流液，濃縮后鑒定.
2．操作步驟 按雙抗體夾心ELISA法四步程序進(jìn)行。即用抗人a2MMcAb包被微孔板，4℃過夜，取出洗滌；加入用PBS 1：2稀釋的尿液標(biāo)本，37℃ 2h，洗滌；加入羊抗人α2M多克隆抗體，37~C 2h，洗滌；加入HRP標(biāo)記的兔抗羊IsC，孵育后加入底物呈色。終止反應(yīng)后在酶標(biāo)儀上讀取492nm波長的吸光度值。按常規(guī)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，算出待測(cè)血a2M含量。
3．正常值范圍與臨床意義 免疫擴(kuò)散法測(cè)得正常男性血清a2M為1．5～3．5z／L，女性為1．35～4．2g／L。2—4歲兒童血清a2M約為成人的2～3倍。更年期婦女血清e(cuò)2M含量也較高。ELBA法檢測(cè)正常人尿液中Q，M含量均低于0．026mg／L。
慢性活動(dòng)性肝炎，肝硬化，急、慢性腎炎，腎病綜合征，糖尿病，惡性腫瘤，活動(dòng)性結(jié)締組織病等患者的血清a2M含量升高。此外，妊娠、服用避孕藥物時(shí)02M含量也升高。在流行性出血熱和肝炎全過程中，發(fā)現(xiàn)疾病進(jìn)展時(shí)a2M升高，進(jìn)入恢復(fù)階段則降至正常水平，動(dòng)態(tài)觀察a2M變化可作為病情判斷的指標(biāo)。直接測(cè)定尿中02M含量，可對(duì)腎臟的早期損害提供有價(jià)值的輔助診斷。