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神經(jīng)生長因子(NGF)的檢測

閱讀:1713          發(fā)布時間:2011-12-17

根據(jù)神經(jīng)生長因子(nervegrowthfactor,NGF)對神經(jīng)細胞的促增殖作用,可采用PCI2細胞分化試驗檢測其活性。PCI2細胞是大鼠的嗜鉻細胞瘤細胞株,培養(yǎng)于含15%馬血清、5%FCS的RPMI-1640培養(yǎng)液中,在普通培養(yǎng)瓶中成團懸浮生長。將培養(yǎng)瓶包被鼠尾膠后,PCI2可貼壁生長。

 
    1.將PCI2置36%,7。5%C02條件下培養(yǎng),每2天更換2/3培養(yǎng)液,待細胞接近匯合時,用含1mmol/L  EGTA的上述培養(yǎng)液培養(yǎng)細胞6h或過夜,用RPMI-1640/水(1:1)洗滌細胞3次,吹打分離單個細胞,按1:4分瓶繼續(xù)培養(yǎng)。
 
    2.用上述培養(yǎng)液將PCI2細胞配成106/mL,每個35mm培養(yǎng)皿中加入0.5mL細胞懸液和系列稀釋的NGF待測樣品或標準品,設不加NGF為對照。繼續(xù)培養(yǎng)20—24h。
 
    3.在倒置相差顯微鏡下觀察PCI2細胞。細胞成簇生長,計數(shù)100個細胞簇,其中細胞有纖維突起的細胞簇為陽性細胞簇,減去不加NGF對照細胞孔中的陽性細胞簇即為NGF誘導的分化細胞簇數(shù)。以分化細胞簇數(shù)對樣品稀釋度作圖,繪制劑量-反應曲線,計算樣品中NGF的含量。

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