DIG標記及檢測試劑盒

DIG（地高辛）DNA標記及檢測試劑盒

DIG DNA labeling and Detection Kit

原理：用DIG-dUTP為底物，隨機摻入法進行DNA標記，通過酶聯免疫雜交的方法檢測。該試劑盒可以標記25次反應，每次標記的DNA量為10ug-20ug，并可做50張10×10cm膜的雜交和檢測。 應用：非放射性DNA標記及檢測試劑盒以檢測0.1pg的同源DNA，能檢測1ug哺乳動物DNA中的單拷貝基因。跟放射性標記系統比較，此試劑盒能快速得到實驗結果，而且消除了放射性同位素的不安全問題。從DNA標記和雜交能見到檢測結果，整個實驗過程24小時內能完成。這試劑盒的靈敏度與特異性使它適用于所有的雜交技術以替代放射性同位素標記和放射自顯影術。這個標記方法和檢測系統適用于DNA—印跡轉移、菌落雜交、噬斑雜交及原位雜交。

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1　HLA概述

　　
　　HLA的定義由三部分組成：（1）對象模型模板（OMT）：是對仿真中的對象、對象屬性和對象間信息交互的格式和內容進行定義的標準化描述。（2）框架與規則集： HLA共定義了10條規則，描述仿真和聯邦成員的職責，以確保一個聯邦內仿真的正確交互。其中前5條規則規定一個聯邦必須滿足的要求，而后5條規則則是一 個聯邦成員必須滿足的條件。（3）聯邦成員訪問RTI的接口規范：描述在操作過程中的仿真交互方式，提供了盟員與RTI之間功能接口，描述了六類服務，共 101個操作。
　　
2 對象模型模板（OMT）

　　
　　HLA中的對象模型主要用來描述兩類系統，一類是用來描述聯邦中的各個聯邦成員，即創建各單個的HLA仿真的對象模型（SOM）。另一類是用來描述一 個聯邦中相互之間存在信息交換特性的那些聯邦成員，即創建HLA的聯邦對象模型（FOM）。無論是描述SOM還是描述FOM，OMT的主要目的都是為了便于仿真系統的互操作和仿真部件的重用。
　　OMT作為對象模型的模板規定了記錄這些對象模型內容的標準格式和語法。但對于對象模型如何建立，OMT必須記錄哪些內容，OMT本身并沒有說明。OMT是HLA實現互操作和重用的重要機制之一，由以下幾個表格組成：
　　·對象模型鑒別表：用來記錄鑒別HLA對象模型的重要信息；
　　·對象類結構表：用來記錄聯邦／仿真中的對象類及其父類一子類關系；
　　·交互類結構表：用來記錄聯邦／仿真中的交互類及其父類一子類關系；
　　·屬性表：用來說明聯邦／仿真中對象屬性的特性；
　　·參數表：用來說明聯邦／仿真中交互參數的特性；
　　·枚舉數據類型表：用來對出現在屬性表／參數表中的枚舉數據類型進行說明；
　　·復合數據類型表：用來對出現在屬性表／參數表中的復合數據類型進行說明；
　　· 路徑空間表：用來說明一個聯邦中對象屬性和交互的路徑空間；
　　·FOM／SOM詞典：用來定義各表中使用的所有術語。
　　當描述一個聯邦或單個仿真系統（聯邦成員）的HLA對象模型時，它們都必須使用上述幾個表。即OMT對聯邦對象模型（FOM）和仿真對象模型 （SOM）都適用。一個HLA對象模型至少要包含一個對象類或交互類，但在某些情況下，描述對象模型的一些表可能是空表。
　　
3 HLA的框架和規則

　　
　　（1） 聯邦應該有一個聯邦對象模型FOM，該FOM應與HLA的OMT相容。FOM是說明HLA聯邦數據交換的手段，它記錄了聯邦成員對于在聯邦運行期間需相互交換的數據的內容、格式及數據交換的條件所達成的協議。
　　（2） 在一個聯邦中，FOM中的所有對象應屬于各個成員而不應在RTI中。HLA中，將凡是與仿真有關的對象實體的表達放在聯邦成員中而不是放在RTI中， 但是RTI可以擁有管理對象模型（MOM）中對象實例。
　　（3） 在執行聯邦時，各成員中間所有FOM規定的數據交換必須通過RTI進行。HLA中， FOM中描述的對象或交互類的數據，都是聯邦成員之間可能需交換的數據，而成員之間要想實現交換數據，只有借助于RTI提供的服務。
　　（4） 在聯邦執行中，成員應按HLA接口規范與RTI交互，即訪問RTI應遵循接口規范。
　　（5） 在聯邦執行中，在任一給定時間，一個對象屬性只能為一個成員所擁有。HLA中，不同成員可以擁有同一個對象實例的不同屬性。為了保證整個聯邦中數據的一致 性，在任意給定時間zui多只能讓一個聯邦成員擁有（從而有權改變其值）任意給定的對象實例的屬性。
　　（6） 聯邦成員應有一個符合OMT規范的成員對象模型（SOM）。聯邦成員通常由實現仿真功能的仿真系統組成，SOM描述了它們為實現自己的仿真功能，需向外獲取（定購）及本身能向外提供（公布）的信息。
　　（7） 成員應能更新和（或）使用其SOM中記錄的對象的屬性，能接收與發送SOM中記錄的交互。聯邦成員在聯邦運行中向其它成員公布自己所負責建模的對象的屬性 的數值，及借助于RTI提供的服務接收自己想要的來自其它成員的屬性數據是各個聯邦成員的責任。
　　（8） 成員應按SOM中的規定，在聯邦執行中動態地轉移與接收屬性的所有權。對HLA聯邦來說，實際仿真劇情的實現，常常要在具體的聯邦成員之間進行對象屬性所 有權動態轉換，RTI通過"所有權管理"提供相應的服務，而具體的實現是聯邦成員之間的責任與合作。
　　（9） 成員應按SOM中的規定，更新對象屬性的條件（如改變閥值）。HLA讓擁有某些對象屬性所有權的成員有權產生這些屬性的不斷變化的值（往往通過模型的解算得到），并由它負責通過RTI將不斷公布這些屬性值，從而使定購這些屬性的其它成員能得到這些屬性的值。
　　（10） 成員應能管理局部時間，從而保證它能協調地與聯邦中的其它成員交換數據。HLA通過時間管理服務給聯邦成員提供了靈活的仿真時間推進的方法，從而使HLA 可以適用于連續、離散或混和類型的仿真。但它需要聯邦成員自己管理自己的邏輯仿真時間（本地時間）。

HLA（人類白細胞抗原）系統是目前所知人體zui復雜的多態系統。自1958年發現（Jean Dausset）*個HLA抗原，到20世紀70年代，HLA便成為免疫遺傳學、免疫生物學和生物化學等學科的一個重要新興研究領域。現在，已基本弄清其系統的組成、結構和功能，闡明了其理化性質和生物學作用。這些研究成果不僅具有重要的理論意義，而且具有巨大的生物醫學價值。
　　1 HLA的本質及其結構
　　HLA是具有高度多態性的同種異體抗原，其化學本質為一類糖蛋白，由一條α重鏈（被糖基化的）和一條β輕鏈非共價結合而成。其肽鏈的氨基端向外（約占整個分子的3/4），羧基端穿入細胞質，中間疏水部分在胞膜中。HLA按其分布和功能分為Ⅰ類抗原和Ⅱ類抗原。
　　2 HLA的遺傳控制
　　HLA受控于稱作人類主要組織相容性復合體（MHC）的基因簇。MHC定位于第6染色體短臂上。
　　HALⅠ類抗原的特異性取決于α重鏈，由HLA-A、B、C位點編碼；其β輕鏈是β2-微球蛋白，編碼基因在第15染色體。HLAⅡ類抗原受控于HLA-D區（包含5個亞區），由其中的A基因和B基因分別為α重鏈和β輕鏈編碼，抗原多態性取決于β輕鏈。以上各基因（名稱為WHO命名委員會1975年修訂）均系多態性位點（復等位），且共顯性。如果把MHC作為一個整體來看待，其多態性則更為突出。保守地估計，至少存在1300個不同的單體型，相應地約有17×107個基因型。這就是除同卵雙生子以外幾乎無HLA相同者的遺傳基礎，從而HLA可視作個體的“身份證”。
　　3 HLA的生物學意義
　　HLA這一多態系統在其種系發展過程中被保存下來，具有特殊的生物學意義。
　　3．1 靶功能
　　HLAⅠ類抗原分布于所有有核細胞。其抗原特異性在于肽鏈抗原決定簇的特定氨基酸順序。這些抗原可被外來物質例如某種病毒或化學物質加以改變，當這些基因產物被改變之后，便成為自身免疫原，成為免疫排除的耙子。可見，耙功能的實質在于“識別自我”，以保證機體的完整性。因此，分布于所有細胞及其多態性這一特點十分重要。
　　3．2 識別功能
　　HLA的識別功能實指在免疫反應中*的協同作用。抗體在B細胞生成，但在多數情況下，需要巨噬細胞和T淋巴細胞參與。其過程是：抗原經巨噬細胞處理后，抗原信息傳遞給T輔助細胞，后者再將信息傳給B細胞，使B細胞進而分化生成專一抗體。在這個過程中，T輔助細胞不僅識別致敏巨噬細胞上的抗原，同時也要識別巨噬細胞是否與其本身的Ⅱ類抗原相一致。就是說，只有巨噬細胞的單體型和T輔助細胞的單體型相一致時，T輔助細胞才被激活，從而使免疫反應在嚴密的遺傳控制下進行。
　　4 HLA的醫學價值
　　4．1 HLA與器官移植
　　HLA的研究原初是在器官移植研究推動下開展起來的。故此，HLA又稱移植抗原。臨床實踐表明，同種異體移植（除同卵雙生子外）的排斥應是成功率的zui大障礙。在遺傳學中，MHC是作為一個單位孟德爾式傳遞的。因此，同胞之間可有HLA相同、半相同和不同3種情況。實踐證明，HLA相同的同胞供者的腎移植，90％以上效果良好；單體型不同的供者，效果明顯下降；兩單型皆不同者則很少存活。HLA本質和功能的揭示，為移植配型提供了重要的理論依據。可以說，器官移植是當代醫學一項重要成就。
　　4．2 作為某些疾病的遺傳標志
　　1972年Russel*個報告銀屑病（牛皮癬）患者攜帶HLA-B13或HLA-B17。此后陸續發現大量其它疾病與特定的HLA相關，其中，HLA-B27抗原見于大約90％的強直性脊椎炎病人，以至使HLA分型具有了診斷價值，甚至，能較早地證實疾病亞型之間的臨床區別，例如，尋常銀屑病與HLA相關，而膿皰性銀屑病則不然；青少年性胰島素依賴型糖尿病與HLA-B8、HLA-Bw15和HLA-B18相關，而晚期發作型糖尿病并無這種相關。因此，特定類型的HLA便成為某些疾病的遺傳標志。例如，常染色體隱性遺傳的腎上腺皮質增生癥是由于21-羥化酶缺乏。應用HLA抗原多態性作群體關聯分析和家系連鎖分析，發現有兩個羥化酶位點（21-OHA和21-OHB）與HLA-B、DR緊密連鎖。依此，可用HLA作出產前診斷。在優生學中，可以根據現有資料，對某些疾病推算出孩子患病的相對風險率。另一方面，關于HLA與長壽的關系，亦形成一個研究熱點。
　　4．３HLA與法醫
　　HLA因其高度多態性而成為zui能代表個體特異性并伴隨個體終身的穩定的遺傳標志，在無關個體之間HLA型別*相同的幾率級低。法醫學通過HLA基因型或表型檢測進行個體識別以“驗明正身”，同時因其單倍型遺傳特征，也是親子鑒定的重要手段。
　　HLA（體系結構，High Level Architecture）
　　在美國國防建模與仿真辦公室（DMSO）1995年10月制定的建模與仿真主計劃（MSMP）中，提出了未來建模/仿真的共同技術框架。它包括三個方 面：高層體系結構（HLA）、任務空間概念模型（CMMS）和數據標準（DS）。它們的共同目標是實現仿真間的互操作，并促進仿真資源的重用，具體地說， 就是通過計算機網絡使得分散分布的各仿真部件能夠在一個統一的仿真時間和仿真環境下協調運行，且可以重復使用。HLA的基本思想就是使用面向對象的方法， 設計、開發及實現系統不同層次和粒度的對象模型，來獲得仿真部件和仿真系統高層次上的互操作性與可重用性。
[編輯本段]高層體系結構
　　1996年8月DMSO正式公布了HLA的定義和規范。經過改進完善，HLA的規則、接口規范、對象模型模板三項內容已在2000年9月22日由美國 IEEE標準化委員會正式定為IEEE1516， IEEE1516.1，IEEE1516.2 HLA標準。OMG，北約M&S組織也采納HLA作為標準。