18017270358
實驗原理
具有兩個或兩個以上肽鍵的化合物皆有雙縮脲反應。在堿性溶液中雙縮脲與銅離子結合形成復雜的紫好色復合物。而蛋白質及多肽的肽鍵與雙縮脲的結構類似，也能與Cu2+形成紫紅色絡合物，其zui大光吸收在540nm處。其顏色深淺與蛋白質濃度成正比，而與蛋白質的分子量及氨基酸的組成無關，該法測定蛋白質的濃度范圍適于1~10mg /mL。雙縮脲法常用于蛋白質的快速測定。
紫紅色銅雙縮脲復合物分子結構為：
試劑和器材
一、試劑
雙縮脲試劑：取1.5g硫酸銅（CuSO4?5H2O）和6.0g的酒石酸鉀鈉（NaKC4H4O6 · 4H2O）溶于500mL蒸餾水中，在攪拌下加入300mL 10%NaOH溶液，用水稀釋至1000mL。此試劑可長期保存、備用。
二、標準和待測蛋白質溶液
標準蛋白溶液
10mg/mL結晶牛血清白蛋白溶液或相同濃度的酪蛋白溶液（用0.05mol/L氫氧化鈉溶液配制）。作為標準用的蛋白質要預先用微量克氏定氮法測定蛋白質含量，根據其純度稱量，配制成標準溶液。
待測蛋白質溶液
人血清（稀釋10倍）。測試其他蛋白質樣品應稀釋適當倍數，使其濃度在標準曲線測試范圍內。
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