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研域(上海)化學(xué)試劑有限公司

牛副結(jié)核ELISA試劑盒診斷方法

時(shí)間:2016-4-7閱讀:1009

 牛副結(jié)核病是由甬0結(jié)核分枝桿菌引起的一種以反芻獸為主的慢性傳染病,又叫johne病。該方法的敏感性76%,特異性97%,通過(guò)對(duì)2483頭奶牛進(jìn)行檢測(cè),檢出率為6.1%,并與常規(guī)的補(bǔ)反和反常反應(yīng)進(jìn)行了比較。“前對(duì)該病尚無(wú)有效的治療辦法,*此病的*辦法是檢出、隔離或淘汰病畜,目前本病的檢疫主要依賴(lài)補(bǔ)反和反常反應(yīng)。本文建立了牛副結(jié)核病ELISA試劑盒診斷方法。
一、材料與試劑
1、草分枝桿菌吸收抗原
2、副結(jié)核分枝桿菌親和層析抗原
3、牛副結(jié)核病參考陰性血清兔抗牛IgG酶標(biāo)抗體
4、牛副結(jié)核病參考陽(yáng)性血清
5、草分枝桿菌吸收抗原
1~5項(xiàng)均由單位供應(yīng)。
6、器材 ELISA試劑盒板, 酶聯(lián)免疫吸附檢測(cè)儀、加樣器、洗瓶、恒溫箱等。
二、操作方法
1、抗原包被 以抗原稀釋液將副結(jié)核親和層析抗原稀釋至50µg/ml,每孔包被0.1ml.部分對(duì)照孔以牛血清白蛋白(50µg/ml)包被。
2、血清處理 取待檢血清、參考陽(yáng)性血清、參考陰性血清各0.10ml,加生理鹽水0.80ml,加草分枝桿菌吸收抗原0.10ml,混勻,37℃感作1h.取0.10ml,加血清稀釋液0.90ml(注意血清稀釋液中加牛血清白蛋白,不加犢牛血清)。混勻即可
3、正式試驗(yàn) 按表12-4進(jìn)行。每個(gè)樣品加2孔,以求OD平均值。
三、結(jié)果判定
在對(duì)照組成立的前提下, 即參考陽(yáng)性血清呈棕,參考陰性血清及其它對(duì)照孔呈無(wú)色或淺, 判定待測(cè)結(jié)果。
1、目測(cè)判定 與參考陽(yáng)性血清孔顏色相當(dāng),即呈棕,判為ELISA陽(yáng)性(+)。
2、酶標(biāo)儀判定(490nm) 以底物溶液對(duì)照孔調(diào)零,校正參考陽(yáng)性血清OD值為1.0(或相應(yīng)規(guī)定值),測(cè)定待檢孔。當(dāng)OD≥0.50,判ELISA陽(yáng)性(+);0.40≤OD≤0.49判ELISA試劑盒可凝(±);OD<0.40,判ELISA試劑盒陰性(-)。

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