牛副結(jié)核病是由甬0結(jié)核分枝桿菌引起的一種以反芻獸為主的慢性傳染病，又叫johne病。該方法的敏感性76％，特異性97％,通過(guò)對(duì)2483頭奶牛進(jìn)行檢測(cè)，檢出率為6.1％，并與常規(guī)的補(bǔ)反和反常反應(yīng)進(jìn)行了比較。“前對(duì)該病尚無(wú)有效的治療辦法，*此病的*辦法是檢出、隔離或淘汰病畜，目前本病的檢疫主要依賴(lài)補(bǔ)反和反常反應(yīng)。本文建立了牛副結(jié)核病ELISA試劑盒診斷方法。
一、材料與試劑
1、草分枝桿菌吸收抗原
2、副結(jié)核分枝桿菌親和層析抗原
3、牛副結(jié)核病參考陰性血清兔抗牛IgG酶標(biāo)抗體
4、牛副結(jié)核病參考陽(yáng)性血清
5、草分枝桿菌吸收抗原
1～5項(xiàng)均由單位供應(yīng)。
6、器材 ELISA試劑盒板， 酶聯(lián)免疫吸附檢測(cè)儀、加樣器、洗瓶、恒溫箱等。
二、操作方法
1、抗原包被 以抗原稀釋液將副結(jié)核親和層析抗原稀釋至50µg/ml,每孔包被0.1ml.部分對(duì)照孔以牛血清白蛋白（50µg/ml）包被。
2、血清處理 取待檢血清、參考陽(yáng)性血清、參考陰性血清各0.10ml，加生理鹽水0.80ml，加草分枝桿菌吸收抗原0.10ml，混勻，37℃感作1h.取0.10ml，加血清稀釋液0.90ml（注意血清稀釋液中加牛血清白蛋白，不加犢牛血清）。混勻即可
3、正式試驗(yàn) 按表12－4進(jìn)行。每個(gè)樣品加2孔，以求OD平均值。
三、結(jié)果判定
在對(duì)照組成立的前提下， 即參考陽(yáng)性血清呈棕，參考陰性血清及其它對(duì)照孔呈無(wú)色或淺， 判定待測(cè)結(jié)果。
1、目測(cè)判定 與參考陽(yáng)性血清孔顏色相當(dāng)，即呈棕，判為ELISA陽(yáng)性（＋）。
2、酶標(biāo)儀判定（490nm） 以底物溶液對(duì)照孔調(diào)零，校正參考陽(yáng)性血清OD值為1.0（或相應(yīng)規(guī)定值），測(cè)定待檢孔。當(dāng)OD≥0.50，判ELISA陽(yáng)性（＋）；0.40≤OD≤0.49判ELISA試劑盒可凝（±）；OD<0.40，判ELISA試劑盒陰性（－）。