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堿性磷酸酶研究應用
最近更新時間：2011-9-16
提 供 商：上海研生實業有限公司資料大小：8B
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堿性磷酸酶也是目前免疫診斷試劑產品zui常用的標記酶之一。與辣根過氧化物酶（HRP）相比，ALP用作標記酶的優點是，穩定性高、靈敏度高，缺點是成本高，標記困難。
在研究中zui常用的ALP如下：
◇細菌堿性磷酸酶Bacterial alkaline phosphatase （BAP）, 來源：Escherichia coli C4 ；
◇ Shrimp alkaline phosphatase （SAP）, 來源：一種北極蝦 （Pandalus borealis） ;
◇ 小牛腸堿性磷酸酶Calf Intestinal Alkaline Phosphatase （CIP）;
◇ 胎盤堿性磷酸酶Placental alkaline phosphatase （PALP）和分泌性堿性磷酸酶the secreted alkaline phosphatase （SEAP），后者是前者的C末端短缺版——與PALP相比，SEAP沒有PALP的C末端zui后24個氨基酸（這24個氨基酸構成了與糖基化磷脂酰肌醇靶向錨定的區域）
ALP主要應用于分子生物學和酶免分析中：
★分子生物學中主要用作核酸的去磷酸化。因為DNA通常會在5'端結合磷酸基團，用ALP去磷酸化能防止DNA分子5'端與3'端連接，從而在后續步驟準備好之前讓DNA分子抑制處于線性化狀態;同樣，通過去磷酸化可用作放射標記示蹤。通常用作這些目的用的zui多的是Shrimp alkaline phosphatase （SAP），因為在反應完成之后它是zui容易滅活的。
★酶免分析中應用zui多的是ELISA，以競爭法測小分子抗原為例，抗體先與固相載體結合，然后讓待測樣品與事先經ALP標記過的該抗原競爭地與抗體結合，洗去未反應的過量ALP-抗原，加入顯色底物。則可以通過與按梯度濃度變化的標準品繪出的標準曲線對比從而知道待測樣品中抗原的濃度。ELISA中用的比較多的是 辣根過氧化物酶（HRP），底物為OPD， 深桔黃色 ，檢測波長492nm；TMB， 藍綠色，檢測波長450nm 堿性磷酸酶，底物為PNPP（對－消基苯磷酸酯）， 黃色 ，檢測波長405nm
★目前工業上一個普遍的應用是作為檢驗牛奶的巴斯的滅菌的標志：被巴斯德過高溫滅菌的分子會被滅活，向其中和未巴斯滅菌的牛奶中加入ALP的底物，2分鐘后未滅菌的樣品應該顯黃色，如果待測樣品（指被巴斯滅菌過的牛奶）也能呈現相同顏色，則說明巴斯滅菌溫度未過度。當然總有例外，因為有少數細菌會產生耐熱的ALP。