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生孢梭菌制備
最近更新時間：2012-4-24
提 供 商：上海研生實業(yè)有限公司資料大小：938.5KB
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生孢梭菌制備
是要計可培養(yǎng)的數量還是測菌液內菌的數量。如果計可培養(yǎng)的數量的話就直接涂布到瓊脂培養(yǎng)基上，培養(yǎng)后計數就可以。若是要計菌液里的數量可以測一下OD值或者用熒光燃料染色后再在顯微鏡下計數。
菌懸液的濃度要求的確是每毫升小于100cfu，但是在50到100cfu之間，小于50的話容易出現(xiàn)假陰性。還有你是要做無菌的方法驗證還是無菌培養(yǎng)基的靈敏度檢查呢？至于確定菌的量，是在硫乙醇中計數的。
其實無菌方法驗證中的菌懸液的制備也是依中國藥典（2005年版二部）附錄XI H無菌檢查法中“培養(yǎng)基靈敏度檢查”項下的方法，制備成小于100 CFU/ml的對照用菌液。所以無論你做什么，菌懸液的制備方法都是一樣的。
具體方法就是，先把生孢梭菌在硫乙醇中培養(yǎng)24小時，然后吸取1毫升培養(yǎng)液用生理鹽水進行10倍稀釋，我的經驗是，稀釋到10的-7次方就是在100cfu以下了（這個你得自己多做幾次平行實驗或驗證實驗，看到底稀釋到多少倍。zui初不好把握的時候可以同時培養(yǎng)幾個臨近的梯度），然后取至少200ml的硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基到試管里（要求無菌），然后接種1ml制備好的菌懸液到硫乙醇試管里，在32.5度下培養(yǎng)18h，然后開始計數。生孢梭菌在液體的硫乙醇里會長成梭子一樣的單個菌落，這時拿的時候千萬不要震動，然后開始計數（一個單獨的“梭子”計一個菌落）。
注：如果培養(yǎng)時間太長會產生渾濁，不便于計數。如果震動試管也會渾濁。硫乙醇的量盡量大一點，這樣便于計數。
一些具體的東西，還需要你實際去操作后，發(fā)現(xiàn)問題，再解決問題。貌似你現(xiàn)在的經驗不是很足，的是找個懂的人帶你做幾次，或去別的公司或研究所參觀學習，這樣學起來會快一點。