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zenogenpharma STEM-CELLBANKER說明書

2022-7-5  閱讀(1968)

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zenogenpharma STEM-CELLBANKER說明書


STEM-CELLBANKER ® EX GMP 級
(化學定義的冷凍保存溶液

 

    • 描述:

    • STEM-CELLBANKER ® EX GMP 級 (SCB EX) 是一種細胞冷凍保存解決方案,可擴展細胞治療的可能性。SCB EX 是一種簡單的成分,由經靜脈注射證明的成分組成。它是一種含有 DMSO 的冷凍保存溶液和一種無異種物質的產品,配方不含血清和動物成分。SCB EX 還可以保存人類造血干細胞和人類脂肪來源的基質/干細胞。SCB EX 的制造符合日本、歐盟、美國和 PIC/S GMP 指南。所有將產品暴露在環境中的操作均在 A 級區域進行,以確保無菌。

      ※本產品已在 PMDA 內的 MF 中注冊。
      ※本產品成分與HSC-BANKER ® GMP等級相同。

    • 應用:

    • 使用脂肪衍生基質/干細胞 (ADSC) 進行冷凍保存性能測試

      測試:EMO生物醫學

    • 1. 細胞活力測試

      ADSC 與 SCB EX 一起冷凍保存 4、12、24 和 48 周。解凍后立即評估細胞活力(左圖)和解凍后過夜(右圖)。用 SCB EX 冷凍保存的細胞即使在長期冷凍保存后也顯示出高活力,即使在過夜休息后也保持高活力。

      2. 細胞恢復測試

      ADSC 與 SCB EX 一起冷凍保存 4、12、24 和 48 周。然后,我們評估解凍后過夜的細胞附著(細胞恢復;左圖)和解凍和培養 72 小時后的細胞生長速率(倍增時間;右圖)。結果表明,即使經過長期冷凍保存,細胞恢復和細胞生長速度也沒有受到影響。

      3. 小區身份測試

      ADSC 與 SCB EX 一起冷凍保存 4、12、24 和 48 周。然后,我們使用流式細胞儀的陽性和陰性標記評估解凍后的細胞身份。結果表明,即使在長期冷凍保存后,用每種標記物標記的細胞百分比也不受影響。

      陽性標記;CD29、CD73、CD90 和 CD105
      陰性標記;CD11b、CD19、CD34、CD45 和 HLA-DR

      陽性標記數據

      4. 細胞功能測試
      ?。↖DO 量化和抑制 T 細胞增殖測定)

      ADSC 與 SCB EX 一起冷凍保存 4、12、24 和 48 周。然后,我們評估了解凍后 ADSC 的細胞功能。結果表明,即使經過長期冷凍保存,在MSCs存在下IDO表達和T細胞增殖抑制率均不受影響。

      ※吲哚胺-2,3-雙加氧酶(IDO)

    • 協議(CELLBANKER ®系列)

    • 冷凍

      為獲得最佳結果,冷凍保存的細胞應處于對數生長期。可以替代類似或標準的冷凍方案。

      重要提示:最佳方案可能會隨細胞類型而變化。

      解凍

      ※如果成活率低,請嘗試使用冷凍箱等慢速冷凍方法。

      • 從儲存中取出冷凍細胞,在 37 ℃ 振蕩水浴中快速解凍。

      • 立即將每 1ml 細胞與 10ml *細胞培養基稀釋并輕輕混合。

      • 輕輕離心沉淀細胞(3-5 分鐘,1,000~2,000rpm,4 ℃)。取出上清液抽吸器。

      • 用適當體積的*細胞培養基輕輕懸浮細胞。并放入培養瓶中。

      • 根據標準協議繼續進一步的培養程序。

      • 檢查并確保細胞培養物無污染、健康狀況和適當融合等。

      • 進行細胞計數以確定細胞的活力

      • 輕輕離心沉淀細胞(3-5 分鐘,1,000~2,000rpm,4℃)。使用吸氣器去除上清液。

      • 用 CELLBANKER 冷凍保存培養基輕輕懸浮細胞(1 ml 用于 5×105 - 5×106 細胞)。

      • 將細胞懸液以 1ml 等分試樣分裝到已標有細胞系名稱、細胞濃度、傳代日期和其他重要信息的冷凍保存小瓶中。

      • 將小瓶直接置于-80℃保存。如有必要,在小瓶冷凍至少 24 小時后,將冷凍小瓶轉移到液氮儲罐中。

    • 儲存和穩定性:

    • 儲存于 2 至 8 或低于 -20 攝氏度。該產品在此儲存溫度下自生產之日起可保持穩定 3 年。

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