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為什么要熱滅活血清?

閱讀:2664          發布時間:2014-12-10

為什么要熱滅活血清
加熱可以滅活補體系統。激活的補體參與溶解細胞事件,刺激平滑肌收縮,細胞和血小板釋放組胺,激活淋巴細胞和巨噬細胞。在免疫學研究,培養ES細胞,昆蟲細胞和平滑肌細胞時,推薦使用熱滅活血清。
有必要做熱滅活嗎?
實驗顯示,經過正確處理的熱滅活血清,對大多數的細胞而言是不需要的。經此處理過的血清對細胞的生長只有微小的促進,或*沒有任何作用,甚至通常因為高溫處理影響了血清的質量,而造成細胞生長速率的降低。而經過熱處理的血清,沉淀物的形成會顯著的增多,這些沉淀物在倒置顯微鏡下觀察,像是“小黑點”,常常會讓研究者誤以為是血清遭受污染,而把血清放在37℃環境中,又會使此沉淀物更增多,使研究者誤認為是微生物的分裂擴增。
因此我們建議您,若非必須,您可以不需要做熱處理這一步。如此一來,不但節省您寶貴的時間,更確保血清的質量!

熱滅活血清操作步驟

血清買回來滅活前凍融應逐級凍融,即按照-20℃——4℃*融化后,再置入水浴中,與室溫一起升高到56度,這樣的目的是避免溫度驟變,導致血清中的營養物質喪失活性。

血清滅活后分裝保存。按照每次用血清的量分裝,盡量減少血清凍融的次數。分裝時注意無菌。

細胞培養時血清濃度稍大一些。通常細胞培養血清濃度為10%-15%,但如果血清凍融次數過多,那營養物質喪失活性,按15%的濃度配制事實上達不到15%的營養成分,故培養基配置時一般用18%-20%的血清。

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