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公司動態

Elisa試劑盒使用注意事項

閱讀:1065          發布時間:2013-11-20

一、ELISA試劑盒選擇試劑

  選擇質量優良的檢測試劑,嚴格按照試劑說明書進行操作,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。

  二、加樣

  可能原因:

  1)血清或血漿標本分離不好即進行加樣;

      2)手工操作中,加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間過長(特別是室內溫度較高時);

      3)加完標本再加酶試劑時酶濺出孔外。

  解決辦法:

  1)ELISA試劑盒標本為血清:將血液先自然存放1-2小時后,再用3000rmp離心15分鐘;標本為血漿:必須使用含抗凝劑的血液標本收集管,采血后必須立即顛倒采血管混合5-10次,放置一段時間后,3000rpm離心15分鐘;若在幾天內檢測,可放在2-8℃冰箱中,若要貯存,則置于-20℃的低溫冰箱內。

      2) 加樣后及時放入孵箱。

      3) 加酶試劑后用吸水紙在酶標板表面輕拭吸干。

      4) 如果采用AT或其他全自動加樣,選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。

      5) 標本較多時,請分批操作。

  三、 孵育

  可能原因:

  1) 孵育時未貼封片或加蓋,使標本或稀釋液蒸發,吸附于孔壁,難于清洗*;

       2) 孵育時間人為延長,導致非特異性結合緊附于反應孔周圍,難以清洗*。

  解決辦法:

  1) 貼封片或加蓋;

      2) 按說明步驟嚴格控制操作時間。

  四、洗板

  可能原因:

  1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。

       2) 采用半自動洗板機洗板時,洗液量不足,導致洗板不*;洗板針堵塞,抽吸不*;洗板不暢,導致洗板效果差。

       3) 反應板過多造成洗板等待時間長。

  解決辦法:

  1) 保證洗液注滿各孔,洗板針暢通,洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無或少塵的吸水材料)上輕輕拍干;

      2) 合理安排,或多用幾臺洗板機。

  五、ELISA試劑盒顯色

  可能原因:

  1) 顯色劑配制后放置時間過長或使用過期顯色劑;

      2) 加顯色劑時濺出孔外造成液體回流。

  解決辦法:

      1) 顯色劑盡量在臨用前配制,堅持不用過期顯色劑,肉眼可見淺藍色的TMB顯色劑不用;

      2) 加樣時保持顯色劑不外流;

      3) A、B液應避免接觸金屬器械。

  六、終止

  可能原因如加終止液時產生較多氣泡,導致假陽性增加。所以在加終止液時應避免產生氣泡。

  七、讀板

  如讀板時板底不清潔等。應保證酶標板清潔。所以在整個操作過程中保證酶標板不接觸次氯酸; 盡可能實現ELISA檢測標準自動化,有效提高檢測質量。

  在實際操作中,除了選擇優良試劑外,必須嚴格按照操作步驟進行操作,同時作好室內質控、室間質評,以嚴謹的工作作風檢測每一份標本,才能保證檢測質量。現在國內已有相當數量的單位擁有全自動酶標儀,這對于實現ELISA標準化檢測、提高檢測質量起到了重要作用。

 

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