測試盒名稱：大  腸  菌  群  測  試  盒（單料型）
  
   測試盒采用的測定方法： GB/T4789.3-2008大腸菌群MPN計數法
   測試盒的結構特點：分前后兩排透明方管，每個方管里面有一個特別設計的產氣窗，前排三個方管，后排六個方管，均含單料LST培養基，大腸菌群發酵培養基產氣，產氣窗內產生氣泡,；采用無菌包裝，供用戶一次性使用；
   測試盒的特點：  
   （1） 對大腸菌群測定的方法是GB/T4789.3-2008中*法大腸菌群MPN計數法；
   （2） 省去了繁雜的試劑配制、分裝、消毒以及大量的收尾工作，及大地提高了實驗室的工作效率，符合現代檢驗向快速、準確方向發展的要求；
    （3） 試劑盒占用空間小，僅占原來一個樣品的十分之一空間，減少玻璃器皿及培養箱的周轉；
   檢測對象：食品、瓶裝或桶裝飲用（純凈）水
   應用范圍：疾病預防控制中心,食品生產廠家,技術*質檢部門,商檢局,海關。
大腸菌群測試盒（單料型）使用說明
（GB/T4789.3-2008*法大腸菌群MPN計數）

準備測試盒
●.排氣泡：將測試盒前后分別以大約45度角傾斜，必要時可輕輕用力在桌面上敲擊數下，以排除產氣窗內氣泡；并將樣品編號填寫在盒蓋上；
● 開口：將測試盒平放在桌面上，左手揭開活動盒蓋，右手持經火焰消毒并冷卻了的開口器, 在測試盒每管中間位置連續穿刺開口；

樣品的稀釋

    1.固體或半固體樣品：稱取25g樣品，放入盛有225mL磷酸鹽緩沖液或生理鹽水的無菌均質杯內，8000r/min～10000r/min均質1 min～2min，或放入盛有225mL磷酸鹽緩沖液或生理鹽水的無菌均質袋中，用拍擊式均質器拍打1 min～2min，制成1：10的樣品勻液。
     2.液態樣品：用無菌吸管吸取25ml樣品，置盛有225mL磷酸鹽緩沖液或生理鹽水的無菌錐形瓶（瓶內預置適當數量的無菌玻璃珠）中，充分混勻，制成1：10的樣品勻液。
     3. 樣品勻液的pH值應在6.5～7.5之間，必要時分別用1mol/L氫氧化鈉（NaOH）或1mol/L鹽酸（HCl）調節。
     4. 用1mL無菌吸管或微量移液器吸取1：10樣品勻液1mL，沿管壁緩緩注入9mL磷酸鹽緩沖液或生理鹽水的無菌試管中（注意吸管或吸頭*不要觸及稀釋液面），振搖試管或換用1支1ml無菌吸管反復吹打，使其混合均勻，制成1：100的稀釋液。
     5. 根據對樣品污染狀況的估計，按上述操作，依次制作10倍遞增系列稀釋樣品勻液。每遞增稀釋1次，換用1支1ml無菌吸管或吸頭。從制備樣品勻液至樣品接種完畢，全過程不得超過15min.

初發酵試驗

固體樣品
     1：10的勻液1mL三管、1：100的勻液1mL三管、1：1000的勻液1mL三管、采用單料型大腸菌群測試盒；；操作方法如下：
前排三大管內接種1：10的樣品勻液各1mL，后排共六管，其中三管接種1：100的樣品勻液各1mL，另外三管接種1：1000的樣品勻液各1mL，將接種好的測試盒放入托盤內，置36±1℃培養箱內，培養48±2h后，產氣窗內無氣泡者，為大腸菌群陰性，如產氣窗內有氣泡者，則進行復發酵試驗。
據陽性管數查得大腸菌群zui可能數（MPN）檢索表的實際數值報告結果

液體樣品（一般情況下有如下兩種接種方式）：
    A、原液1mL三管、1：10的樣品勻液1mL三管、1：100的樣品勻液1mL三管；操作方法如下：
前排三大管內接種原液各1 mL，后排共六管，其中三管接種1：10樣品勻液各1mL，另外三管接種1：100的樣品勻液各1mL，將接種好的測試盒放入托盤內，置36±1℃培養箱內，培養48±2h后，產氣窗內無氣泡者，為大腸菌群陰性，如產氣窗內有氣泡者，則進行復發酵試驗。
    據陽性管數查得大腸菌群zui可能數（MPN）檢索表的實際數值除以10報告結果；

     B、1：10的樣品勻液1mL三管、1：100的樣品勻液1mL三管、1：1000的樣品勻液1mL三管；操作方法如下：
前排三大管內接種1：10的樣品勻液各1mL，后排共六管，其中三管接種1：100樣品勻液各1mL，另外三管接種1：1000的樣品勻液各1mL；將接種好的測試盒放入托盤內，置36±1℃培養箱內，培養48±2h后，產氣窗內無氣泡者，為大腸菌群陰性，如產氣窗內有氣泡者，則進行復發酵試驗。
    據陽性管數查得大腸菌群zui可能數（MPN）檢索表的實際數值報告結果.

復發酵試驗

     用接種針從所有48±2h 內發酵產氣的LST肉湯管中分別取培養物兩針移種于煌綠乳糖膽鹽（BGLB）肉湯管中，置36±1℃培養箱內，培養24±2h后，觀察產氣情況，產氣者計為大腸菌群陽性管；沒產氣者，繼續培養培養24±2h，產氣者計為大腸菌群陽性管；沒產氣者為陰性管；

注意事項：

●在培養箱內拿出裝有測試盒的托盤以及觀察結果時，應平拿平放，以免由于測試盒的傾向而將陽性管產氣窗內氣泡排出，而影響結果.

（附注：因食品衛生評價標準沒變動，為使檢測結果在進行評價時能轉化為與之相對應的數值，固體樣品只能采用雙料型測試盒；液體樣品可以采用雙料型測試盒；也可以采用單料型測試盒；此僅供參考，各單位根據具體情況，靈活掌握）

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