大腸菌群測試盒（雙料型）使用說明
（GB/T4789.3-2008*法大腸菌群MPN計(jì)數(shù)）

準(zhǔn)備測試盒
●.排氣泡：將測試盒前后分別以大約45度角傾斜，必要時(shí)可輕輕用力在桌面上敲擊數(shù)下，以排除產(chǎn)氣窗內(nèi)氣泡；并將樣品編號(hào)填寫在盒蓋上；
● 開口：將測試盒平放在桌面上，左手揭開活動(dòng)盒蓋，右手持經(jīng)火焰消毒并冷卻了的開口器，在測試盒每管中間位置連續(xù)穿刺開口；

    樣品的稀釋

    1.固體或半固體樣品：稱取25g樣品，放入盛有225mL磷酸鹽緩沖液或生理鹽水的無菌均質(zhì)杯內(nèi)，8000r/min～10000r/min均質(zhì)1 min～2min，或放入盛有225mL磷酸鹽緩沖液或生理鹽水的無菌均質(zhì)袋中，用拍擊式均質(zhì)器拍打1 min～2min，制成1：10的樣品勻液。
    2.液態(tài)樣品：用無菌吸管吸取25ml樣品，置盛有225mL磷酸鹽緩沖液或生理鹽水的無菌錐形瓶（瓶內(nèi)預(yù)置適當(dāng)數(shù)量的無菌玻璃珠）中，充分混勻，制成1：10的樣品勻液。
     3. 樣品勻液的pH值應(yīng)在6.5～7.5之間，必要時(shí)分別用1mol/L氫氧化鈉（NaOH）或1mol/L鹽酸（HCl）調(diào)節(jié)。
     4. 用1mL無菌吸管或微量移液器吸取1：10樣品勻液1mL，沿管壁緩緩注入9mL磷酸鹽緩沖液或生理鹽水的無菌試管中（注意吸管或吸頭*不要觸及稀釋液面），振搖試管或換用1支1ml無菌吸管反復(fù)吹打，使其混合均勻，制成1：100的稀釋液。
     5. 根據(jù)對(duì)樣品污染狀況的估計(jì)，按上述操作，依次制作10倍遞增系列稀釋樣品勻液。每遞增稀釋1次，換用1支1ml無菌吸管或吸頭。從制備樣品勻液至樣品接種完畢，全過程不得超過15min.

初發(fā)酵試驗(yàn)

    固體樣品
    1：10的樣品勻液10mL三管、1：10的樣品勻液1mL三管、1：100的樣品勻液1mL三管；操作方法如下：
前排三大管內(nèi)接種1：10的樣品勻液各10mL，后排共六管，其中三管接種1：10的樣品勻液各1mL，另外三管接種1：100的樣品勻液各1mL，將接種好的測試盒放入托盤內(nèi)，置36±1℃培養(yǎng)箱內(nèi)，培養(yǎng)48±2h后，產(chǎn)氣窗內(nèi)無氣泡者，為大腸菌群陰性，如產(chǎn)氣窗內(nèi)有氣泡者，則進(jìn)行復(fù)發(fā)酵試驗(yàn)。
     據(jù)陽性管數(shù)查得大腸菌群zui可能數(shù)（MPN）檢索表的實(shí)際數(shù)值除以10報(bào)告結(jié)果；

     液體樣品（一般情況下有如下兩種接種方式）：
     A、原液10mL三管、原液1mL三管、1：10的樣品勻液1mL三管；操作方法如下：
     前排三大管內(nèi)接種原液各10 mL，后排共六管，其中三管接種原液各1mL，另外三管接種1：10的樣品勻液各1mL，將接種好的測試盒放入托盤內(nèi)，置36±1℃培養(yǎng)箱內(nèi)，培養(yǎng)48±2h后，產(chǎn)氣窗內(nèi)無氣泡者，為大腸菌群陰性，如產(chǎn)氣窗內(nèi)有氣泡者，則進(jìn)行復(fù)發(fā)酵試驗(yàn)。
     據(jù)陽性管數(shù)查得大腸菌群zui可能數(shù)（MPN）檢索表的實(shí)際數(shù)值除以100報(bào)告結(jié)果；
     B、1：10的樣品勻液10mL三管、1：10的樣品勻液1mL三管、1：100的樣品勻液1mL三管；操作方法如下：

     前排三大管內(nèi)接種1：10的樣品勻液各10mL，后排共六管，其中三管接種1：10樣品勻液各1mL，另外三管接種1：100的樣品勻液各1mL；將接種好的測試盒放入托盤內(nèi)，置36±1℃培養(yǎng)箱內(nèi)，培養(yǎng)48±2h后，產(chǎn)氣窗內(nèi)無氣泡者，為大腸菌群陰性，如產(chǎn)氣窗內(nèi)有氣泡者，則進(jìn)行復(fù)發(fā)酵試驗(yàn)。
     據(jù)陽性管數(shù)查得大腸菌群zui可能數(shù)（MPN）檢索表的實(shí)際數(shù)值除以10報(bào)告結(jié)果；


復(fù)發(fā)酵試驗(yàn)

    用接種針從所有48±2h 內(nèi)發(fā)酵產(chǎn)氣的LST肉湯管中分別取培養(yǎng)物兩針移種于煌綠乳糖膽鹽（BGLB）肉湯管中，置36±1℃培養(yǎng)箱內(nèi)，培養(yǎng)24±2h后，觀察產(chǎn)氣情況，產(chǎn)氣者計(jì)為大腸菌群陽性管；沒產(chǎn)氣者，繼續(xù)培養(yǎng)培養(yǎng)24±2h，產(chǎn)氣者計(jì)為大腸菌群陽性管；沒產(chǎn)氣者為陰性管；

注意事項(xiàng)：

●在培養(yǎng)箱內(nèi)拿出裝有測試盒的托盤以及觀察結(jié)果時(shí)，應(yīng)平拿平放，以免由于測試盒的傾向而將陽性管產(chǎn)氣窗內(nèi)氣泡排出，而影響結(jié)果.

（附注：因食品衛(wèi)生評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)沒變動(dòng)，為使檢測結(jié)果在進(jìn)行評(píng)價(jià)時(shí)能轉(zhuǎn)化為與之相對(duì)應(yīng)的數(shù)值，固體樣品只能采用雙料型測試盒；液體樣品可以采用雙料型測試盒，也可以采用選擇單料型測試盒；此僅供參考，各單位根據(jù)具體情況，靈活掌握）

溫馨提示：
時(shí)請牢記該產(chǎn)品的型號(hào)或編號(hào)，以便我們迅速的為您提供該產(chǎn)品的相關(guān)服務(wù)

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